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第1篇：細(xì)胞核的功能范文

[關(guān)鍵詞] 組蛋白去乙?；?吸煙;慢性阻塞性肺病

[中圖分類(lèi)號(hào)] R563[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1673-7210(2009)07(c)-016-04

Relationship between HDAC activity and lung function as well as smoking in peripheral blood mononuclear cells of COPD patients

CHEN Yanwei1, YANG Jiong2

(1.Department of Pulmonary Medicine, Shenzhen Nanshan Hospital of Guangdong Medical College, Shenzhen518052, China; 2.Department of Pulmonary Medicine, People's Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, China)

[Abstract] Objective: To investigate the histone deacetylase (HDAC) activity in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of COPD patients, and determine the relationship between HDAC activity in PBMC and lung function as well assmoking quantity in COPD patients. Methods: COPD patients, healthy smokers and healthy nonsmokers were selected in our study. The peripheral blood of all subjects were obtained, and PBMC was separated via density gradient centrifugation. Histone was extracted and HDAC activity was detected. The lung function, smoking information of all subjects were recorded. Results: HDAC activity in PBMC from COPD patients was decreased by 40% compared with normal nonsmokers [(12.86±6.14) μmol/(L?μg) and (21.39±4.92) μmol/(L?μg), P=0.000)], this decrease showed statistical significance in stage 1, 2 and 3. HDAC activity in PBMC from healthy smoker was 40% lower than healthy nonsmokers [(12.50±4.27) μmol/(L?μg) and (21.39±4.92) μmol/(L?μg), P=0.000]. HDAC activity in PBMC from COPD was negatively correlated with smoking quantity (r=-0.867, P=0.000 for COPD patients; r=-0.607, P=0.000 for all subjects). In COPD patients who smoked more than 35 pack years and smoked less than 35 pack years, the HDAC activity in PBMC of the former decreased more than a half than that of the later. Conclusion: Smoking is one of the important reasons causing the decrease of HDAC activity in PBMC of COPD patients. HDAC activity in PBMC of COPD patients shows zero correlation with lung function (FEV1, FEV1%, FVC, FVC% and FEV1/FVC), suggesting smoking may have different mechanisms on the local and whole damage of lung.

[Key words] Histone deacetylase; Smoking; Chronic obstructive pulmonary disease

肺部炎癥是引起慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)氣流受限(肺功能)的主要原因。有研究表明,肺部炎癥的標(biāo)志物(IL-8、IL-6、CRP等)與氣流受限(肺功能)程度呈正相關(guān)。COPD患者肺組織和肺泡巨噬細(xì)胞中的HDAC活性與氣流受限呈正相關(guān),HDAC活性越低,氣道炎癥越重,FEV1%越低[1]。HDAC活性降低源于吸煙引起的氧化應(yīng)激的損傷。吸煙可引起直接肺氧化應(yīng)激損傷,也可引起間接的系統(tǒng)性氧化應(yīng)激。

肺泡巨噬細(xì)胞由外周血單核細(xì)胞遷移至肺分化而來(lái)。因此,本研究假設(shè)外周血單核細(xì)胞中HDAC活性低于健康對(duì)照,并觀察外周血單核細(xì)胞中HDAC活性與COPD患者氣流受限(肺功能)的關(guān)系,同時(shí)觀察吸煙量與HDAC活性的關(guān)系,以觀察HDAC活性是否受吸煙量的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 受試者基本情況

收集在武漢大學(xué)人民醫(yī)院體檢及就診的穩(wěn)定期COPD患者。正常對(duì)照為健康志愿者。經(jīng)患者知情同意,抽取外周靜脈血20 ml,加少量肝素抗凝,在4 h內(nèi)進(jìn)行外周血細(xì)胞分離。

1.2 穩(wěn)定期COPD診斷及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

參照GOLD(2006修訂版)和中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組制訂的慢性阻塞性肺病診治指南(2002)。所有患者均除外心、腦血管、肝、腎疾病、糖尿病、腫瘤、風(fēng)濕、結(jié)締組織疾病,以及肺結(jié)核、支氣管擴(kuò)張、支氣管哮喘及肺纖維化患者。

1.3 肺功能測(cè)定

所有受試者均行肺功能測(cè)定,采用Vmax6200(American Sensormedics, Vmax 229 series,Yorba Linda,California)肺功能系統(tǒng)檢測(cè)FVC、FVC%、FEV1、FEV1%、FEV1/FVC,由同一熟練技師操作,以保證測(cè)試的一致性。每位被測(cè)試者肺功能測(cè)定前3 d內(nèi)未使用支氣管擴(kuò)張劑,2周內(nèi)未使用茶堿和激素。

測(cè)試方法:吸入200 μg葛蘭素后10 min,平靜正常呼吸,遂后充分吸氣至肺總量位,迅速用最大力呼氣,呼氣時(shí)間≥6 s,或時(shí)間-容量曲線(xiàn)顯示呼氣相平臺(tái)出現(xiàn)且超過(guò)2 s后,用最快速度用力吸氣至肺總量位。每個(gè)被測(cè)試者分別至少測(cè)定3次(一般最多不超過(guò)8次),每個(gè)被測(cè)試者最佳值與次佳值2次差異小于5% FVC或0.5 L)。

1.4 人外周血單核細(xì)胞分離

人外周血單核細(xì)胞分離用密度梯度離心法[2]。將靜脈血與Hank's buffered salt solution (HBSS)1×緩沖液1∶1混合后共40 ml,裝于50 ml試管中。將混合血與人淋巴細(xì)胞分離液(Lymphoprep,Norway,1.077 g/ml)以2∶1體積混合。配平后用TDL-40L高速水平離心機(jī)離心,2 000 r/min(1 100 g/min),30 min。吸取中間白色薄霧層于新管。加HBSS于每管,將吸取液與HBSS混勻,HBSS體積大于1倍吸取液體積。配平后1 100 r/min,離心8 min。棄上清,加入HBSS吹打,移入一新試管中離心1 000 r/min,8 min,棄上清。將剩余液體混勻,吸取少量于細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),并用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活性。如果細(xì)胞總數(shù)大于1×107個(gè)/ml,活性大于95%,視為合格標(biāo)本;用1 ml槍頭吸取剩余液體于標(biāo)記Ep管中,-70℃凍存。 1.5 直接組蛋白提取

組蛋白提取用HCl和H2SO4 4℃過(guò)夜法[3]。裂解液[10 mmol/L Tris-HCl,pH 6.5,50 mmol/L亞硫酸氫鈉,1% Triton X-100, 10 mmol/L MgCl2,8.6%蔗糖,完全蛋白酶抑制劑混合物(羅氏分子生化公司),20 min,4℃];核沖洗緩沖液(10 mmol/L Tris-HCl,13 mmol/L EDTA,pH 7.4)。

將細(xì)胞微離心5 min;用冰凍裂解緩沖液反復(fù)沖洗片狀沉淀物,直至浮于表面的物質(zhì)清除(每次離心7 500 g/min,5 min)。用核沖洗緩沖液沖洗核片狀沉淀物,并且用50 μl 0.2 mol/L HCl和0.2 mol/L H2SO4在蒸餾水中懸浮。4℃過(guò)夜提取細(xì)胞核,微離心剩余物質(zhì)10 min,用1 ml冰凍丙酮混合上清液,-20℃過(guò)夜。微離心樣本10 min,用丙酮沖洗,干燥,并用蒸餾水稀釋。含有組蛋白的上清液樣品用Bradford protein kit(Bio-Rad)定量。Bradford法(考馬斯亮藍(lán))測(cè)組蛋白濃度。

1.6 HDAC活性檢測(cè)

細(xì)胞核提取物HDAC活性檢測(cè)使用HDAC活性熒光分析試劑盒(Cayman,USA),嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)果用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較采用方差分析;相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析;P

2 結(jié)果

2.1 一般資料

COPD患者26例,均為吸煙者,其中,1期7例,2期8例,3期8例,4期3例;健康吸煙者10例;健康非吸煙者13例,所有受試者均為男性,其身高、體重等無(wú)顯著性差異(P>0.05)。COPD組與健康吸煙組吸煙量無(wú)顯著性差異(P>0.05)。COPD組平均年齡高于健康吸煙組和健康非吸煙組(P0.05)。

2.2 COPD患者外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性

COPD患者外周血單核細(xì)胞總HDAC活性較健康非吸煙者低40%左右[(12.86±6.14) μmol/(L?μg)和(21.39±4.92) μmol/(L?μg),P=0.000];在1、2、3期達(dá)到顯著性差異(圖1);其活性與健康吸煙者比較,無(wú)顯著性差異[(12.86±6.14) μmol/(L?μg)和(12.50±4.27) μmol/(L?μg),P=0.864]。健康吸煙者外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性較健康非吸煙者低40%,與COPD患者比較,無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

圖1外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性比較

Fig. 1Comparison of HDAC activity of PBMC among subgroups

2.3 COPD患者外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性與肺通氣功能的關(guān)系

COPD患者外周血單核細(xì)胞中HDAC活性與肺通氣功能均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)(表1)。

表1 外周血單核細(xì)胞中HDAC活性與FVC、FEV1、FEV1/FVC的關(guān)系

Tab.1 Relationship between FVC, FEV1, FEV1/FVC

and HDAC activity of PBMC

2.4 吸煙受試者外周血單核細(xì)胞中HDAC活性與吸煙量的關(guān)系

外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性與吸煙量(包年)呈負(fù)相關(guān)(在COPD患者中,r=-0.867,P=0.000;在所有吸煙者中,r=-0.607,P=0.000)(圖2)。

圖2外周血單核細(xì)胞中HDAC活性與吸煙的關(guān)系

(A:COPD患者;B:所有吸煙者)

Fig. 2Relationship between HDAC activity in PBMC and

smoking quantity

(A: COPD patients; B: all subjects enrolled)

吸煙量超過(guò)35包年的COPD患者外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性平均值明顯低于吸煙量低于35包年者(圖3)。

圖3吸煙量對(duì)COPD患者外周血單核細(xì)胞

中HDAC活性平均值的影響

Fig. 3Effect of smoking quantity on mean HDAC

activity of PBMC in COPD

3 討論

研究結(jié)果顯示,COPD患者外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性低于健康非吸煙者,與健康吸煙者比較,無(wú)顯著性差異;COPD患者外周血單核細(xì)胞中HDAC活性的降低與COPD氣流受限(肺功能)無(wú)明顯相關(guān),與患者吸煙量呈負(fù)相關(guān),提示外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性降低可能是吸煙的直接作用。

穩(wěn)定期COPD患者外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性降低與相同吸煙量的非COPD吸煙者的下降相同,而且兩組研究對(duì)象隨吸煙量增加,HDAC的下降更為明顯,提示人外周血單核細(xì)胞中HDAC下降與吸煙密切相關(guān)。

吸煙也可以引起染色體重構(gòu)[4],影響NF-κB的表達(dá),促使炎癥基因表達(dá)[5]。吸煙時(shí)每噴煙霧中至少含有10種氧化分子[6],這些氧化分子可以產(chǎn)生氧化應(yīng)激(oxidative stress)。吸煙引起的氧化應(yīng)激使細(xì)胞核HDAC活性降低,同時(shí)可以明顯降低上皮細(xì)胞的HDAC2表達(dá)[7-8],使炎癥因子表達(dá)增加;這種氧激發(fā)可以被抗氧化物N-乙酰半胱氨酸所阻斷[9]。健康吸煙者肺泡巨噬細(xì)胞HDAC活性低于健康不吸煙者[10]。氧化應(yīng)激可以通過(guò)影響細(xì)胞核HDAC活性而影響炎癥基因的表達(dá)。體外研究顯示,氧化應(yīng)激可以明顯降低HDAC活性和上皮細(xì)胞HDAC2的表達(dá)[7]。

本研究通過(guò)提純單核細(xì)胞核HDAC并測(cè)定其活性,提示外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性與吸煙量呈負(fù)相關(guān)。因此,COPD患者外周血單核細(xì)胞HDAC活性降低可能系吸煙所致。

本研究顯示,COPD患者外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性降低與COPD氣流受限(肺功能)零相關(guān)。

肺功能是目前COPD分級(jí)的主要依據(jù),主要反映氣道的阻塞程度,并不能反映COPD的炎癥程度。Ito等[1]發(fā)現(xiàn)HDAC活性在COPD患者的支氣管組織和肺泡巨噬細(xì)胞中降低,這種降低與COPD氣流受限(FEV1、FEV1/FVC)呈正相關(guān)。而本研究并未發(fā)現(xiàn)外周血單核細(xì)胞中的HDAC活性降低與COPD氣流受限(肺功能)相關(guān),其原因可能與吸煙對(duì)肺部和全身的損害不同有關(guān)。

吸煙的煙霧中含有眾多物質(zhì),可以引起直接和間接肺損害。有害成分可以直接影響HDAC的活性或破壞肺組織,引起肺組織的急性損害。只有部分物質(zhì)可以進(jìn)入血液(如氧自由基等)并長(zhǎng)期在血液中停留。這些物質(zhì)可以作用于單核細(xì)胞,通過(guò)抑制HDAC活性來(lái)促進(jìn)炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生。即使停止吸煙,炎癥基因的表達(dá)維持了這種慢性炎癥。炎癥基因的表達(dá)受促炎癥轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié),這些轉(zhuǎn)錄因子主導(dǎo)、放大并且維持了COPD的慢性炎癥反應(yīng)。肺部的局部急性炎癥與肺功能(氣流受限)呈正相關(guān)。而本研究顯示,在穩(wěn)定期COPD患者的外周血單核細(xì)胞中,HDAC活性與COPD肺功能(氣流受限)無(wú)關(guān),提示吸煙對(duì)肺部的直接損害與全身的間接損害可能源于不同的機(jī)制。

[參考文獻(xiàn)]

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第2篇：細(xì)胞核的功能范文

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核分枝桿菌; 抗原提呈; T細(xì)胞亞群; 流式細(xì)胞術(shù); 激光共聚焦顯微鏡

［Abstract］ AIM: To explore whether the human peripheral γδ T cells stimulated by polypeptide heat resistant antigen from Mycobacterium tuberculosis (MtbHAg) express phenotype and have the fuction of antigen presentation. METHODS: The monocytes isolated by adhesion method from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were cultured with GMCSF， IL4 and induced into the mature dendritic cells by adding LPS. PBMCs were stimulated with MtbHAg and IL2 to expand predominantally γδ T cells that were further purified by flow sorting. The pure T cells were isolated from PBMCs using adhesion revomal and nylon column method， labeled with CFSE， and cultured in alone with Mtb secretory antigen (MtbSAg)， in monocytes with MtbSAg， or with MtbSAg prepulsed dendritic cells or MtbHAg activated γδ T cells for 11 days. The proliferation of the CD4+T cells were measured by flowcytometry. The MtbHAg activated γδ T cells were incubated with FITC labelled MtbSAg for different time， and the ingestion of MtbSAg by γδ T cells was measured by flowcytometry and observed with laser confocal microscopye. RESULTS: The expressions of MHCII and costimulatory molecules CD80 and CD86 on γδ T cells that activated by MtbHAg marketly incrased in comparison with that on the resting γδ T cells. The expanded cell counts and proliferation index of the pure nave T cells that induced by MtbSAg pretreated activated γδ T cells were similar to that induced by mature DC. By using flowcytometer and laser confocal microscope， FITC labellaed MtbSAg was ingested by the activated γδ T cells. CONCLUSION: γδ T cells stimulated by polypeptide MtbHAg express the phenotype of professional antigenpresenting cells and they are able to present MtbSAg to nave T cells to induce the proliferation of CD4+T cells.

［Keywords］Mycobacterium tuberculosis; antigen presentation; T lymphocyte subpopulation; flow cytometry; laser confocal microscope

以往的研究表明機(jī)體在抗結(jié)核桿菌（Mycobacterium tuberculosis， Mtb）感染免疫中， 主要有αβ T細(xì)胞（CD4＋和CD8＋T細(xì)胞）和巨噬細(xì)胞發(fā)揮重要作用， 而近年的許多研究證明， γδ T細(xì)胞在抗Mtb感染中也起到重要的防御作用， 并可能通過(guò)與其他免疫細(xì)胞之間相互作用， 影響機(jī)體在抗Mtb感染中的免疫應(yīng)答過(guò)程。在健康人外周血中， γδ T細(xì)胞僅占T細(xì)胞庫(kù)的2%～10%， 根據(jù)其TCRδ鏈V區(qū)片段不同又可以分為Vδ1+和Vδ2+二種亞型， Vδ1+T細(xì)胞主要分布在黏膜上皮和皮膚組織， 而Vδ2+T細(xì)胞則主要分布在外周血中。已有研究發(fā)現(xiàn)Vδ2+T細(xì)胞能識(shí)別小分子的非肽類(lèi)抗原， 并在此類(lèi)抗原的刺激下產(chǎn)生顯著的擴(kuò)增［1， 2］。有研究發(fā)現(xiàn)， 從扁桃體分離的未活化的γδ T細(xì)胞用異戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate， IPP) 和來(lái)自大腸埃希菌的非肽類(lèi)抗原4羥基3甲基2烯基焦磷酸［(E)4hydroxy3methylbut2enyl pyrophosphate， HMBPP］刺激后， 表達(dá)協(xié)同刺激分子和MHCⅡ類(lèi)分子的能力與單核細(xì)胞來(lái)源的， 脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）刺激誘導(dǎo)成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell， DC）相似［3］。但以往的研究， 以及我們以前的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)來(lái)自結(jié)核桿菌的多肽類(lèi)耐熱抗原也可優(yōu)勢(shì)擴(kuò)增人Vδ2+T細(xì)胞［4， 5］。本實(shí)驗(yàn)中， 我們用多肽類(lèi)Mtb耐熱抗原(Heat resistant antigen， MtbHAg)優(yōu)勢(shì)擴(kuò)增人外周血中的γδ T（Vδ2+）細(xì)胞， 觀察活化后的γδ T細(xì)胞是否能表現(xiàn)出抗原提呈細(xì)胞的表型以及是否具有抗原提呈的功能， 探討γδ T細(xì)胞在抗Mtb感染的天然免疫和獲得性免疫中的橋聯(lián)作用。

1 材料和方法

1.1 材料 Mtb耐熱抗原(MtbHAg)和Mtb分泌性抗原(MtbSAg)由本實(shí)驗(yàn)室從培養(yǎng)的MtbH37Ra株制備獲得， 羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰胺酯(Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester， CFSE) 購(gòu)自Molecular Probes公司; RPMI1640培養(yǎng)液(GIBCO公司) 補(bǔ)充L谷氨酰胺2 mmol/L、 二巰基乙醇(2ME)50 μmol/L、 丙酮酸鈉1 mmol/L、 慶大霉素50 mg/L和新生小牛血清(NBS， 杭州四季青公司) 100 mL/L后為完全RPMI1640培養(yǎng)液; 異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate， FITC) 和二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide， DMSO) 購(gòu)自Merk 公司; 熒光抗體小鼠抗人CD4PE、 小鼠抗人TCRγδPE、 小鼠抗人CD14FITC、 小鼠抗人HLADRPecy 5.5和小鼠抗人CD83FITC等購(gòu)自Caltag公司; 小鼠抗人CD80FITC和CD86FITC購(gòu)自eBioscience公司。

1.2 方法

1.2.1 γδ T細(xì)胞的活化和分選純化 抽取健康志愿者外周血5～10 mL， 肝素抗凝， 用淋巴細(xì)胞分離液和梯度離心法常規(guī)分離獲取外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood monouclear cells， PBMC）， 將PBMC用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度為1×109/L， 加入24孔板， 再加入Mtb耐熱抗原(MtbHAg) 2.5 mg/L， 置于37℃、 50 mL/L CO2中培養(yǎng)5 d后分孔培養(yǎng)， 每隔3 d加入rhIL2 5×104 U/L， 約9 d即可得到富含γδ T細(xì)胞的活化T細(xì)胞， 經(jīng)抗TCRPE染色后， 用PBS制備分選用細(xì)胞懸液(1×1010/L)， 在流式細(xì)胞儀FACSCalibur上進(jìn)行分選獲取純化的γδ T細(xì)胞。

1.2.2 DC的體外培養(yǎng)及檢測(cè) 常規(guī)方法分離獲取PBMC， 加入24孔板中， 細(xì)胞密度為每孔5×109/L， 37℃、 50 mL/L

CO2培養(yǎng)2 h后吸去懸浮細(xì)胞， 并用預(yù)熱的RPMI1640輕洗培養(yǎng)孔， 以去除殘留懸浮細(xì)胞， 即獲得貼壁細(xì)胞。補(bǔ)充培養(yǎng)液后加入rhGMCSF 100 μg/L， IL4 100 μg/L， 第3天時(shí)半量換液， 并再次添加GMCSF和IL4， 第6 天半量換液的同時(shí)再加入LPS 1 mg/L， 第8天收獲懸浮細(xì)胞， 分別用小鼠抗人CD83FITC， CD14FITC和HLADRPeCy5.5標(biāo)記后在流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血單核細(xì)胞來(lái)源DC的成熟程度。

1.2.3 尼龍毛柱法分離純化T淋巴細(xì)胞 常規(guī)方法分離獲取PBMC， 調(diào)整細(xì)胞密度為1×109/L， 加入6孔板中， 2 mL/孔， 置于37℃、 50 mL/L CO2中培養(yǎng)2 h后， 吸出懸浮細(xì)胞， 調(diào)整細(xì)胞密度為1×1010/L， 注入已制備好的尼龍毛柱內(nèi)， 另加入5 mL的完全RPMI1640液， 密封， 37℃、 50 mL/L CO2中孵育1 h后， 用RPMI1640完全培養(yǎng)液沖洗毛柱， 收集沖洗出來(lái)的細(xì)胞， 即為純化T細(xì)胞（purified T， pu T)。

1.2.4 CFSE標(biāo)記pu T 將獲得的pu T調(diào)整細(xì)胞密度為5×109/L， 每毫升細(xì)胞懸液加入1 μL CFSE， 使其終濃度為2 μmol/L， 37℃染色10 min后取出用含100 mL/L NBS的完全RPMI1640培養(yǎng)液洗2次后將染色后pu T制成細(xì)胞懸液(1×109/L)。此即為CFSE標(biāo)記的pu T (pu TCFSE)。

1.2.5 FITC標(biāo)記MtbSAg 將MtbSAg(1 g/L) 1 mL加入已處理過(guò)的透析袋中， 扎緊袋口放入pH9.5碳酸鹽緩沖液透析過(guò)夜， 透析后取出， 加DMSO配制FITC溶液（1 g FITC/L）混合， 使FITC/MtbSAg的比例為50 μg∶1 mg。室溫避光在水平振蕩器上慢速振搖2 h后轉(zhuǎn)入透析袋中， 對(duì)200 mL PBS透析8 h后換液， 共3次。4℃避光保存。

1.2.6 四種不同的培養(yǎng)方法刺激αβ T細(xì)胞擴(kuò)增 CFSE標(biāo)記的pu T， 調(diào)整細(xì)胞密度為1×109/L， 加入24孔板培養(yǎng)， 每孔1 mL， 并按以下四種不同方法加入MtbSAg或抗原提呈細(xì)胞。a: CFSE標(biāo)記的pu T單獨(dú)培養(yǎng)， 同時(shí)加入MtbSAg 25 mg/L。b: CFSE標(biāo)記的pu T中加入單核細(xì)胞 (單核細(xì)胞: pu TCFSE為1∶100)， 加MtbSAg 25 mg/L。c: 體外培養(yǎng)的單核細(xì)胞來(lái)源的成熟DC(MDC)與終濃度25 mg/L 的MtbSAg孵育， 37℃ 2 h后， RPMI1640洗滌3次， 加入pu TCFSE (DC∶Pu TCFSE為1∶100) 中培養(yǎng)。d: 流式分選純化的MtbHAg活化γδT細(xì)胞與終濃度為25 mg/L的MtbSAg孵育， 37℃ 2 h后， RPMI1640洗滌3次， 加入到pu TCFSE(活化的γδT細(xì)胞: pu TCFSE為1∶100)中培養(yǎng)。上述4種細(xì)胞培養(yǎng)在第4天時(shí)加IL2 (5萬(wàn)U/L)擴(kuò)增細(xì)胞， 隔天半量換液并添加同量的IL2以維持細(xì)胞生長(zhǎng)。

1.2.7 FCM和激光共聚焦檢測(cè)活化γδ T細(xì)胞對(duì)FITC標(biāo)記MtbSAg的攝入 將MtbHAg活化的γδ T細(xì)胞的密度調(diào)整為1×1010/L， 取100 μL細(xì)胞懸液， 加FITC標(biāo)記的MtbSAg 10 μL， 抗TCRγδPE 3 μL， 避光 37℃， 水浴30 min 至120 min后， PBS洗滌3次， 盡量去除殘余液體， 加入10 g/L多聚甲醛200 μL 固定后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)FITC陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)， 表示攝入MtbSAg細(xì)胞的比率。同時(shí)將水浴90 min的試管輕彈混勻后取出2 μL， 加少量甘油混合后滴在載玻片上， 加上蓋玻片后即在激光共聚顯微鏡（Nikon C1 Si）下觀察和拍攝記錄， 獲取的圖象文件用Freeviewer軟件分析顯示。

1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示， 數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。樣本均數(shù)的兩兩比較， 采用t檢驗(yàn)， P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血單核細(xì)胞來(lái)源DC的表型檢測(cè) PBMC來(lái)源的單核細(xì)胞經(jīng)GMCSF， IL4培養(yǎng)6 d后加入LPS誘導(dǎo)為成熟的DC后， 用FCM檢測(cè)其表型， 發(fā)現(xiàn)HLADR仍為高表達(dá)（81.89%)， 代表DC成熟的CD83與培養(yǎng)前低表達(dá)（7.83％）相比非常顯著地高表達(dá)(85.40%)， 而單核細(xì)胞的特征標(biāo)志CD14從培養(yǎng)前的87.2%降低到5.31%。

2.2 活化的γδT細(xì)胞表達(dá)協(xié)同刺激分子 檢測(cè)健康人外周血中靜止的γδ T細(xì)胞表面CD80、 CD86和HLADR的表達(dá)水平非常低， 分別為(1.37±2.36)%， (4.13±3.33)%和(8.84±5.44)%; 而經(jīng)MtbHAg活化后γδ T細(xì)胞CD80、 CD86和HLADR的表達(dá)分別增加到(62.33±7)%、 (89.12±3.5)%、 (80.56±7.29)% (圖1)。

2.3 不同培養(yǎng)方法對(duì)純化初始T細(xì)胞增殖總數(shù)的影響 在4種不同培養(yǎng)方案中， 加入的純化T細(xì)胞數(shù)均為1.0×106， 單獨(dú)加MtbSAg的a組， 和加單核細(xì)胞和MtbSAg的b組， 培養(yǎng)到第11天時(shí)， 細(xì)胞數(shù)分別為1.2×106和5.6×106。而純化T細(xì)胞加入預(yù)先與MtbSAg處理的DC（c組）和γδ T細(xì)胞（d組）， 培養(yǎng)11 d后的細(xì)胞數(shù)分別為7.79×106和8×106(圖2)。

2.4 FCM分析CD4+T細(xì)胞的增殖情況和Modfit軟件分析CD4+T細(xì)胞的增殖指數(shù) 用CFSE標(biāo)記的純化T細(xì)胞用4種方法培養(yǎng)到第11天時(shí)， 標(biāo)記CD4熒光mAb后用流式細(xì)胞儀測(cè)定和分析， 結(jié)果表明純化T細(xì)胞單獨(dú)加MtbSAg的a組， 增殖的CD4+T細(xì)胞僅占4.5%; 加單核細(xì)胞和MtbSAg的b組， 增殖的CD4+T細(xì)胞所占比例為35.4%， 而加入MtbSAg預(yù)處理的成熟DC和活化γδT細(xì)胞的c組和d組， 增殖的CD4+T細(xì)胞所占比例分別達(dá)到56.4%和57.1%（圖3A）。用Modfit軟件中的增殖分析模塊進(jìn)行分析， 得到CD4+T細(xì)胞各代細(xì)胞所占百分率， 增殖指數(shù)(Proliferation Index， PI， 即增殖后細(xì)胞總數(shù)與增殖前細(xì)胞總數(shù)的比值。在加入MtbSAg預(yù)處理的DC（c組）和活化γδT細(xì)胞（d組）， 培養(yǎng)第11天時(shí)CD4+T細(xì)胞的PI分別為58.9和51.9， 且增殖的代數(shù)主要集中在第9、 10代， 分別為75.93%和75.71%。加入單核細(xì)胞的b組CD4+T細(xì)胞的PI為24.39， 第9、 10代所占的比例為57.65%， 而僅有純化T細(xì)胞的a組中， CD4+T細(xì)胞的PI和第9、 10代所占的比例僅為4.5%和4.04%（圖3B）。

2.5 激光共聚焦顯微鏡觀察活化的γδ T細(xì)胞攝入SAg MtbHAg刺激活化的γδ T細(xì)胞與FITC標(biāo)記的MtbSAg在37℃孵育90 min 時(shí)， 同時(shí)加入抗TCRγδ PE熒光抗體， 在激光共聚焦顯微鏡下觀察， 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜被染成紅色的γδ T細(xì)胞內(nèi)分布有大量呈綠色熒光（FITC）細(xì)小散點(diǎn)物質(zhì)(圖4)。

2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)活化的γδ T細(xì)胞攝入MtbSAg MtbHAg激活的γδ T細(xì)胞與FITCMtbSAg在37℃孵育時(shí)， 加入抗TCRγδ PE熒光抗體， 用流式檢測(cè)發(fā)現(xiàn)， MtbSAg攝入率即γδ T細(xì)胞中FITC+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)隨時(shí)間延長(zhǎng)不斷增加。在孵育30、 60和90 min時(shí)， 攝入率分別為(26.68±3.58)%、 (48.09±3.29)%和(53.32±3.29)%; 但是在120 min時(shí)降低至(31.28±5.80)% (圖5)。

3 討論

為了探討多肽類(lèi)抗原激活的人γδ T細(xì)胞是否也具有抗原提呈作用， 首先考慮是否有涉及抗原提呈細(xì)胞有關(guān)的表型分子的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)采用多肽類(lèi)的MtbHAg作為優(yōu)勢(shì)激活γδ T細(xì)胞的抗原， 其中具有激活γδ T細(xì)胞效應(yīng)的主要組分是Mr在10 000～14 000的非分泌性耐熱多肽［4， 5］。用這種多肽抗原激活的γδ T細(xì)胞在培養(yǎng)增殖到第11天時(shí)， 其表面HLADR和協(xié)同刺激分子(CD80和CD86)從培養(yǎng)前的低表達(dá)（1％～8％）顯著上調(diào)為高表達(dá)（62％～89％）， 表明這些細(xì)胞已具有抗原提呈細(xì)胞的表型。

Brandes等［3］發(fā)現(xiàn)IPP活化γδ T細(xì)胞攝入可溶性抗原后與初始αβ T細(xì)胞共同培養(yǎng)促使細(xì)胞增殖。本實(shí)驗(yàn)中純化T細(xì)胞（幾乎均是αβ T細(xì)胞）與MtbSAg摻入的DC培養(yǎng)11 d后數(shù)量增加7倍， 而與MtbSAg摻入的活化γδ T細(xì)胞共同培養(yǎng)后， αβ T細(xì)胞的數(shù)量增加8倍。我們進(jìn)一步用CFSE標(biāo)記初始純T淋巴細(xì)胞后， 再與MtbSAg摻入的DC或γδ T細(xì)胞培養(yǎng)， 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)后用Modfit軟件進(jìn)行分析CD4+T細(xì)胞各代細(xì)胞所占百分率， 發(fā)現(xiàn)由活化γδ T細(xì)胞和成熟DC作為抗原提呈細(xì)胞的二組， 培養(yǎng)到晚期時(shí)增殖的細(xì)胞絕大多數(shù)均是集中在第9、 10代。說(shuō)明引起CD4+T細(xì)胞增殖的能力幾乎相同。這些結(jié)果表明， 用MtbHAg活化的γδ T細(xì)胞和成熟DC一樣， 具有提呈可溶性抗原給初始T細(xì)胞， 引起CD4+T增殖的能力。這與 Brandes報(bào)道的用非肽類(lèi)抗原刺激的γδ T細(xì)胞提呈可溶性抗原的結(jié)果相一致。

為了證實(shí)MtbHAg活化的γδ T細(xì)胞能攝入蛋白抗原， 本實(shí)驗(yàn)將活化的γδ T細(xì)胞與FITC標(biāo)記的MtbSAg在37℃的條件下孵育， 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示γδ T細(xì)胞攝入SAg的能力隨著時(shí)間的增加而增加（30 min 至 90 min）。同時(shí)， 在激光共聚焦顯微鏡下也觀察到γδ T細(xì)胞能將抗原攝入胞內(nèi)。

綜上所述， 經(jīng)MtbHAg活化γδ T細(xì)胞具有抗原提呈作用， 其功能活性似乎與成熟DC沒(méi)有明顯差別， 但γδ T細(xì)胞更容易獲取和體外操作。因此， 這種活化的γδ T細(xì)胞可在制備疫苗和免疫治療中成為新的目標(biāo)［6］。

參考文獻(xiàn)

［1］ Hayday A， Theodoridis E， Ramsburg E， et al. Intraepithelial lymphocytes: exploring the third way in immunology［J］. Nat Immunol， 2001， 2(11): 997-1003.

［2］ Chen ZW， Letvin NL. Adaptive immune response of Vγ9Vδ2T cells: a new paradigm［J］. Trends Immunol， 2003， 24(4): 213-219.

［3］ Brandes M， Willimann K， Moser B. Professional antigenpresentation function by human γδ T cells［J］. Science， 2005， 309(5732): 264-268.

第3篇：細(xì)胞核的功能范文

【摘要】

目的: 本研究旨在探索紫杉醇、 順鉑誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡后能否具有較強(qiáng)的免疫原性， 并可以被抗原提呈細(xì)胞交叉提呈并促進(jìn)免疫應(yīng)答。方法: 用巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)和白介素4（IL4）刺激人外周血單核細(xì)胞分化誘導(dǎo)為樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）， 6 d后將DC和經(jīng)紫杉醇聯(lián)合順鉑在體外誘導(dǎo)發(fā)生凋亡的人卵巢癌細(xì)胞株共同培養(yǎng)， 并以?xún)鋈诩?xì)胞共培養(yǎng)DC組和單獨(dú)DC組作對(duì)照， 共培養(yǎng)4 h后， 進(jìn)行激光掃描共聚焦顯微鏡觀察DC細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬作用， 同時(shí)以流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)不同培養(yǎng)組DC的分化和成熟程度。結(jié)果: 紫杉醇、 順鉑誘導(dǎo)的凋亡卵巢癌細(xì)胞可被DC有效吞噬， 與對(duì)照組相比， 凋亡組DCs的表達(dá)及成熟度均明顯增高， 并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。結(jié)論: 紫杉醇、 順鉑誘導(dǎo)的凋亡卵巢癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的免疫原性， 可以促進(jìn)DC的分化和成熟。

【關(guān)鍵詞】 紫杉醇; 順鉑; 樹(shù)突狀細(xì)胞; 細(xì)胞凋亡; 抗原提呈

［Abstract］ AIM: To explore wheather apoptotic ovarian cancer cells induced by paclitaxelcisplatin could be crosspresented by antigen presenting cells and promote immune responses. METHODS: DCs were generated from peripheral blood monocytes in RPMI1640 supplemented with GMCSF and IL4. After 6 days’ incubation， DCs were further cocultured with either apoptotic HO8910 cell lines induced by paclitaxelcisplatin or control cells for four hours. Maturation of DCs was compared among different groups according to their surface markers through flow cytometry assay and their phagocytosis ability was evaluated by confocal microscopy scanning assay. RESULTS: Apoptotic ovarian cancer cells induced by paclitaxelcisplatincan were phagocytized more efficiently by DCs.Resulting is more cellularity and maturation of DCs in apoptotic cellinduced groups than control group(P

［Keywords］paclitaxel; cisplatin; dendritic cells; apoptotic cells; antigen presentation

化療藥物通過(guò)誘導(dǎo)凋亡來(lái)殺死腫瘤細(xì)胞， 而凋亡的腫瘤細(xì)胞是否具有免疫原性一直是倍受爭(zhēng)議的話(huà)題， 近來(lái)研究表明化療藥物誘導(dǎo)的凋亡腫瘤細(xì)胞能否有效激發(fā)免疫應(yīng)答， 與腫瘤細(xì)胞的性質(zhì)和化療藥物有關(guān)［1］。本研究旨在探索紫杉醇聯(lián)合順鉑化療藥物誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡后的免疫原性， 探討誘導(dǎo)凋亡的腫瘤細(xì)胞能否被樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell， DC）交叉提呈， 從而促進(jìn)免疫應(yīng)答， 為臨床制定合理的化療聯(lián)合免疫療法治療腫瘤提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料 紫杉醇、 順鉑購(gòu)自山東齊魯制藥廠; 淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自上?；瘜W(xué)試劑廠; 巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor， GMCSF)、 白介素4（interleukin4， IL4）、 腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factorα， TNFα）均購(gòu)自R&D公司; CFSE(carboxyfluorescein succinimidylester)活細(xì)胞探針購(gòu)自Invitrogen公司; 小鼠抗人抗體CD14、 CD80、 CD83、 CD86、 CD1a單克隆抗體(mAb)購(gòu)自ebioscience公司; AnnexionⅤPI核酸染料購(gòu)自深圳晶美公司; RPMI1640培養(yǎng)液、 2.5 g/L胰酶、 胎牛血清（fetal bovine serum， FBS）購(gòu)自Gibco公司; 人卵巢癌HO8910細(xì)胞株為上海市免疫學(xué)研究所饋贈(zèng); 人濃縮白細(xì)胞由自愿者提供。

1.2 方法

1.2.1 人外周血細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化和培養(yǎng)DC 取60 mL濃縮WBC， PBS稀釋至200 mL， 采用淋巴細(xì)胞分離液經(jīng)密度梯度離心分離獲取外周血單個(gè)核細(xì)胞， PBS洗滌細(xì)胞2次， 細(xì)胞計(jì)數(shù)， 在6孔板中以無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞至密度為5×109/L， 置37℃、 50 mL/L CO2培養(yǎng)箱2 h后取出， 洗去懸浮細(xì)胞（收集備用）， 加入含GMCSF(100 μg/L)、 IL4(50 μg/L)和100 mL/L FBS的RPMI1640培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)貼壁細(xì)胞， 第3天半量換液， 第6天收集懸浮細(xì)胞， 計(jì)數(shù)。

1.2.2 HO8910凋亡細(xì)胞的制備 將HO8910細(xì)胞按紫杉醇和順鉑不同的作用劑量和不同時(shí)間分組處理， 紫杉醇順鉑濃度分別為2.5～0.3 mg/L、 25～3 mg/L、 125～15 mg/L、 250～30 mg/L， 分別作用12 h、 24 h和36 h后， 用2.5 g/L胰酶消化貼壁細(xì)胞， 將細(xì)胞用PBS重懸至1×109/L， 取100 μL， 以藥物未處理組為空白對(duì)照， 參照Annexin VPI試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率。

1.2.3 HO8910凍融抗原制備 收獲HO8910細(xì)胞， 用PBS重懸至2×1010/L， 置液氮內(nèi)10 min， 取出后速投入37℃水浴溶解， 反復(fù)5次。以3 000 r/min離心10 min， 收集上清， -80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 DC與凋亡細(xì)胞激光共聚焦掃描 消化對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期HO8910細(xì)胞株， 以PBS 重懸細(xì)胞至1×109/L， 加入CFSE終濃度為25 μmol/L， 50 mL/L CO2、 37℃培養(yǎng)箱共孵育30 min， RPMI1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞1次后， 用含100 mL/L胎牛血清（FBS）的RPMI1640液重懸細(xì)胞， 并鋪板培養(yǎng)。次日加入紫杉醇和順鉑（濃度為250～30 mg/L）， 培養(yǎng)24 h（此條件為1.2.2步驟實(shí)驗(yàn)得出誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的最佳濃度和時(shí)間）后取出， 收集懸浮細(xì)胞， 計(jì)數(shù)。凋亡細(xì)胞與培養(yǎng)6 d后的DC以1∶1比例共孵育， 以未處理細(xì)胞為對(duì)照， 按相同比例和DC共培養(yǎng)， 4 h后取出， 用PBS洗滌細(xì)胞， 加入小鼠抗人PECD83抗體， 共孵育30 min后， 用PBS洗滌細(xì)胞， 并用40 g/L多聚甲醛固定懸浮細(xì)胞， 置于細(xì)胞甩片機(jī)中1 000 r/min離心3 min， 將細(xì)胞固定于載玻片上， 500 mL/L甘油PBS封片， 激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)。

1.2.5 不同類(lèi)型腫瘤抗原負(fù)載DC表面標(biāo)志的檢測(cè) DC培養(yǎng)至6 d， PBS沖洗收獲所有的DC， 分為3組進(jìn)行實(shí)驗(yàn): 空白組， 單純DC組; 凍融組: HO8910凍融抗原負(fù)載DC組; 凋亡組: 紫杉醇順鉑誘導(dǎo)HO8910凋亡細(xì)胞負(fù)載DC組。共培養(yǎng)4 h后洗滌細(xì)胞， 用100 mL/L FBS1640懸浮細(xì)胞， 并加入TNFα至100 μg/L， 培養(yǎng)24 h后流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)DC細(xì)胞表面CD1a、 CD14、 CD80、 CD83、 CD86的表達(dá)。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)量資料以x±s表示， 采用SPSS11.5數(shù)據(jù)包方差分析， P

2 結(jié)果

2.1 紫杉醇順鉑誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞株HO8910凋亡最佳時(shí)間與劑量的選擇 為確定紫杉醇和順鉑聯(lián)合誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞株HO8910的最佳作用劑量和最適作用時(shí)間， 我們選取了4個(gè)作用濃度和3個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)（見(jiàn)前）處理HO8910細(xì)胞， 結(jié)果顯示紫杉醇順鉑作用濃度為125～15 mg/L， 作用時(shí)間12 h后細(xì)胞凋亡開(kāi)始明顯增加， 以250～30 mg/L濃度作用24 h細(xì)胞基本完全凋亡。顯微鏡下可見(jiàn)作用24 h后， 細(xì)胞呈懸浮狀， 部分細(xì)胞胞膜不完整。作用36 h后FCM檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞大多呈壞死狀態(tài)， 顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞呈碎片。上述結(jié)果表明， 紫杉醇和順鉑聯(lián)合誘導(dǎo)HO8910細(xì)胞凋亡時(shí)， 濃度250～30 mg/L， 作用24 h為凋亡最適劑量、 最佳時(shí)間點(diǎn)效應(yīng)（圖1）。

圖1 紫杉醇/順鉑作用不同濃度與不同時(shí)間細(xì)胞的凋亡比例（略）

Fig 1 The percentage of apoptotic cells induced by Paclitaxel/Cisplatin at different concentrations and time points

a: 125 paclitaxel+15 mg/L cisplatin for 12 h; b: 250 paclitaxel+ 30 mg/L cisplatin for 24 h; c: 250 paclitaxel+30 mg/L cisplatin for 36 h.

2.2 外周血單核細(xì)胞來(lái)源的DC的體外誘導(dǎo) 經(jīng)常規(guī)貼壁法獲得外周血單核細(xì)胞后， 采用通用的GMCSF和IL4條件培養(yǎng)基體外誘導(dǎo)分化DC， 培養(yǎng)3 d后， 在倒置光學(xué)顯微鏡下觀察可見(jiàn)細(xì)胞開(kāi)始呈集簇生長(zhǎng)， 部分細(xì)胞的細(xì)胞膜有突起， 培養(yǎng)至第6天， 可見(jiàn)大部分細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)， 胞體大且外形不規(guī)則， 細(xì)胞膜呈樹(shù)突狀突起， 胞質(zhì)豐富， 并具有典型DC形態(tài)（圖2）， 表明細(xì)胞已向DC分化， 可用于進(jìn)一步表型分析和功能檢測(cè)。

圖2 倒置顯微鏡下DC的形態(tài)特征（略）

Fig 2 The morphology of induced DC observed with inverted microscope(×400)

2.3 誘導(dǎo)DC細(xì)胞的表型檢測(cè) 外周血來(lái)源的單核細(xì)胞經(jīng)GMCSF和IL4誘導(dǎo)培養(yǎng)6 d后， 獲得未成熟的DC細(xì)胞， 采用單獨(dú)TNFα作用、 TNFα﹢凍融細(xì)胞和TNFα﹢凋亡細(xì)胞培養(yǎng)24 h后， FCM檢測(cè)DC表面標(biāo)志的表達(dá)。結(jié)果顯示條件培養(yǎng)第6天較培養(yǎng)前CD14的表達(dá)明顯下降， CD1a、 CD80、 CD86的表達(dá)上調(diào)， CD83的表達(dá)為10%左右（圖3）。培養(yǎng)7 d后單獨(dú)TNFα作用和TNFα+凍融細(xì)胞作用后CD83表達(dá)約35%左右， 兩者間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 但其在TNFα﹢凋亡細(xì)胞作用后表達(dá)上升為50%， 且與前兩者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

圖3 誘導(dǎo)前、 GMCSF/IL4、 GMCSF/IL4/TNFα誘導(dǎo)后細(xì)胞表面標(biāo)志變化（略）

Fig 3 Alteration of surface markers on preinduced monocytes， GMCSF/IL4 induced and GMCSF/IL4/TNFα induced DC cells

表1 不同腫瘤抗原刺激后DC表面標(biāo)志的表達(dá)（略）

Tab 1 Comparative analysis of surface markers on DC pulsed with different types of tumor antigens

aP

2.4 凋亡細(xì)胞可以被DC細(xì)胞有效的吞噬 比較DC與凋亡的HO8910細(xì)胞和未處理HO8910細(xì)胞共培養(yǎng)后， DC對(duì)兩類(lèi)細(xì)胞的吞噬情況， 結(jié)果顯示（圖4）僅在凋亡組中可見(jiàn)DC膜與凋亡細(xì)胞融合、 DC細(xì)胞胞體內(nèi)有凋亡小體、 小顆粒狀溶解碎片等一系列DC吞噬凋亡細(xì)胞的現(xiàn)象， 而DC對(duì)正常的HO8910無(wú)吞噬作用。進(jìn)一步通過(guò)FCM檢測(cè)DC吞噬凋亡細(xì)胞在時(shí)相上是否存在差異， 結(jié)果表明隨共培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)， DC的吞噬未見(jiàn)增加， 4 h與24 h之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖4 DC對(duì)凋亡腫瘤細(xì)胞、 未處理的腫瘤細(xì)胞吞噬的激光共聚焦掃描（略）

Fig 4 Phagocytosis of dendritic cells against apoptotic and normal HO8910 cell lines

A: Apoptosis HO8910 cell lines; B: HO8910 cell lines.

3 討論

卵巢癌死亡率極高， 減少卵巢癌復(fù)發(fā)、 提高預(yù)后的一個(gè)重要策略是在手術(shù)和化療后再應(yīng)用如免疫治療、 分子靶向治療和基因治療等鞏固療法［2］。近年來(lái)研究表明化療藥物誘導(dǎo)的凋亡腫瘤細(xì)胞能夠有效激發(fā)免疫應(yīng)答［3］。如果能將卵巢癌免疫治療與傳統(tǒng)治療方法合理聯(lián)合將為卵巢癌的治療開(kāi)辟新的途徑、 帶來(lái)新的曙光。研究證明腫瘤免疫逃逸的機(jī)制不僅由于缺乏抗原， 而且與抗原不能被有效提呈給T細(xì)胞而不能產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答有關(guān)［4］。因此腫瘤免疫治療的一個(gè)巨大挑戰(zhàn)是如何使抗原被有效提呈而激發(fā)有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答。如果化療誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞具有免疫原性、 能被APCs提呈則是化療聯(lián)合免疫治療的基礎(chǔ)。

Nowak等［5］學(xué)者發(fā)現(xiàn)二氟脫氧胞嘧啶核苷介導(dǎo)的凋亡細(xì)胞不是耐受原， 凋亡細(xì)胞能誘導(dǎo)DC成熟并激活相關(guān)的T細(xì)胞。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)化療誘導(dǎo)的凋亡腫瘤細(xì)胞數(shù)目增加， 使得APCs吞噬作用加強(qiáng)， APCs被激活后釋放更多的前炎性細(xì)胞因子， 從而促進(jìn)APCs對(duì)腫瘤抗原的交叉提呈［6］。而Casares等［7］發(fā)現(xiàn)絲裂霉素C致凋亡的腫瘤細(xì)胞不具有免疫原性。上述研究結(jié)果提示， 不同腫瘤細(xì)胞經(jīng)不同化療藥物作用后， 其免疫原性仍然存在不確定性。紫杉醇和鉑類(lèi)是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的卵巢癌一線(xiàn)化療藥物， 本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用紫杉醇聯(lián)合順鉑誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞株凋亡后， 論證凋亡細(xì)胞對(duì)DC的影響。應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)與凋亡細(xì)胞共培養(yǎng)的DC胞內(nèi)見(jiàn)吞噬凋亡小體， 且DC胞體中出現(xiàn)小顆粒狀溶解碎片， 而DC對(duì)正常HO8910無(wú)吞噬作用。同時(shí)FCM檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與凋亡細(xì)胞共培養(yǎng)的DC， 其共刺激分子表達(dá)較空白組和凍融組顯著升高， 因此相同數(shù)量凋亡腫瘤細(xì)胞的免疫原性強(qiáng)于凍融腫瘤抗原， 表明DC通過(guò)吞噬負(fù)載凋亡細(xì)胞后其成熟度的表達(dá)明顯增加， 行使抗原提呈的功能顯著增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明紫杉醇+順鉑誘導(dǎo)的凋亡卵巢癌細(xì)胞并不隔離抗原， 相反使交叉提呈的腫瘤抗原性顯著增加， 促進(jìn)了DC的成熟與提呈作用。

此外， 本研究中還有一個(gè)發(fā)現(xiàn)， 即凍融組在加凍融抗原前后， DC的共刺激分子表達(dá)無(wú)明顯改變， DC未被凍融抗原活化。我們認(rèn)為部分原因有可能是由于加入凍融抗原的效價(jià)過(guò)低， 但更可能是來(lái)源于HO8910的凍融腫瘤抗原本身不具有誘導(dǎo)異體DC活化的抗原表位， 但凋亡組加凋亡細(xì)胞后， DC的共刺激分子表達(dá)改變明顯。本研究認(rèn)為應(yīng)用凋亡的細(xì)胞作為抗原可能不需要識(shí)別腫瘤特異性肽段和受MHC限制， 化療誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞有望成為免疫治療的自身抗原， 這些對(duì)于DC疫苗的制備及化療聯(lián)合免疫治療提供了重要的信息。

腫瘤的免疫治療規(guī)范化是一個(gè)尚未解決的問(wèn)題， 如何將免疫治療與傳統(tǒng)的化療結(jié)合起來(lái)更是一個(gè)空白的領(lǐng)域。越來(lái)越多的研究認(rèn)為化療誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞促進(jìn)免疫應(yīng)答反應(yīng)。因此如何將免疫治療與化療合理結(jié)合將是今后致力研究的課題， 本課題為此研究提供了重要理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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第4篇：細(xì)胞核的功能范文

關(guān)鍵詞：包裝設(shè)計(jì);實(shí)用功能;審美價(jià)值

中圖分類(lèi)號(hào)：J0 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-291X（2014）31-0024-02

包裝設(shè)計(jì)是人類(lèi)文化活動(dòng)的重要組成部分，體現(xiàn)了人類(lèi)心智的積極、創(chuàng)造。在中國(guó)當(dāng)代包裝設(shè)計(jì)發(fā)展的實(shí)踐進(jìn)程中，尤其是在信息時(shí)代多元文化語(yǔ)境對(duì)中國(guó)包裝設(shè)計(jì)的圍合影響下，把握和堅(jiān)持包裝設(shè)計(jì)的文化性，挖掘、整理中國(guó)包裝設(shè)計(jì)中優(yōu)秀豐富的文化內(nèi)涵，將傳統(tǒng)的文化思想精髓同當(dāng)代設(shè)計(jì)的要素有機(jī)結(jié)合起來(lái)尤為重要。

一、功能的實(shí)用價(jià)值

商品的包裝強(qiáng)調(diào)對(duì)客戶(hù)需要的滿(mǎn)足，而產(chǎn)品正是滿(mǎn)足消費(fèi)者需要的組合體，而不單單是實(shí)體的組件。還包括消費(fèi)者對(duì)虛榮心的滿(mǎn)足、對(duì)名譽(yù)、威望的獲取以效用的增進(jìn)等等。良好的包裝能增加產(chǎn)品的功能、擴(kuò)大產(chǎn)品的效用，成為產(chǎn)品不可缺少的一部分。包裝設(shè)計(jì)，涉及到功能、材料和形式三個(gè)方面的因素。設(shè)計(jì)師的創(chuàng)造能力，都體現(xiàn)于對(duì)這三個(gè)要素的良好的處理之中。三個(gè)要素中，功能決定形式，功能是主導(dǎo)因素。商品包裝舉具有以下三個(gè)功能：

1.保護(hù)功能

保護(hù)功能是包裝最基本的功能，即使商品不受各種外力的損壞。一件商品，要經(jīng)多次流通，才能走進(jìn)商場(chǎng)或其他場(chǎng)所，最終到消費(fèi)者手中，這期間，需要經(jīng)過(guò)裝卸、運(yùn)輸、庫(kù)存、陳列、銷(xiāo)售等環(huán)節(jié)。在儲(chǔ)運(yùn)過(guò)程中，很多外因如撞擊、潮濕、光線(xiàn)、氣體、細(xì)菌等因素，都會(huì)威脅到商品的安全。因此，作為一個(gè)包裝設(shè)計(jì)師，在開(kāi)始設(shè)計(jì)之前，首先要想到包裝的結(jié)構(gòu)與材料，保證商品在流通過(guò)程中的安全。

2.便利功能

所謂便利功能，也就是商品的包裝是否便于使用、攜帶、存放等。一個(gè)好的包裝作品，應(yīng)該以“人”為本，站在消費(fèi)者的角度考慮，這樣會(huì)拉近商品與消費(fèi)者之間的關(guān)系，增加消費(fèi)者的購(gòu)買(mǎi)欲，對(duì)商品的信任度，也促進(jìn)消費(fèi)者與企業(yè)之間溝通。很多人購(gòu)買(mǎi)易拉罐裝的飲料時(shí)，都喜歡開(kāi)蓋時(shí)的那一聲“啪”帶來(lái)的。

3.銷(xiāo)售功能

人們常說(shuō)“酒香不怕巷子深”、“一等產(chǎn)品、二等包裝、三等價(jià)格”，只要產(chǎn)品質(zhì)量好，就不愁賣(mài)不出去。在市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)日益強(qiáng)烈的今天，營(yíng)銷(xiāo)推廣的作用與重要性也為廠商深諳。人們已感覺(jué)到“酒香也怕巷子深”。如何讓自己的產(chǎn)品得以暢銷(xiāo)，如何讓自己的產(chǎn)品從琳瑯滿(mǎn)目的貨架中跳出，只靠產(chǎn)品自身的質(zhì)量與媒體的轟炸，是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。

在各種超市與自選賣(mài)場(chǎng)如雨生春筍般而起的今天，最直接面向消費(fèi)者是產(chǎn)品自身的包裝。好的包裝，能直接吸引消費(fèi)者的視線(xiàn)，讓消費(fèi)者產(chǎn)生強(qiáng)烈的購(gòu)買(mǎi)欲，從而達(dá)到促銷(xiāo)的目的。

正如人們常說(shuō)的 “包裝是沉默的商品推銷(xiāo)員”。如今，很多聰明的廠商與廣告策劃公司，都把包裝列為企業(yè)的4P策略之一（Position市場(chǎng)、Product產(chǎn)品、Package包裝、Prices價(jià)格）。把包裝融入CI之中，在推銷(xiāo)產(chǎn)品的同時(shí)，也提升了自身的企業(yè)形象。

總之，功能的實(shí)用價(jià)值是包裝設(shè)計(jì)的最根本屬性，一旦失去了其實(shí)用價(jià)值，任何設(shè)計(jì)都失去了其存在的意義。

二、藝術(shù)的審美價(jià)值

1.包裝設(shè)計(jì)的綜合性

包裝涉及知識(shí)范圍很廣泛，對(duì)設(shè)計(jì)師而言現(xiàn)代社會(huì)的消費(fèi)是―個(gè)極富挑戰(zhàn)的境地，不能用舊的觀念來(lái)做現(xiàn)代的設(shè)計(jì)。因此，設(shè)計(jì)師除了天賦資質(zhì)之外，創(chuàng)造的關(guān)鍵是敏感，要對(duì)商品、商店、市場(chǎng)和其他流通環(huán)節(jié)的親身體驗(yàn)和科學(xué)的考察，并不斷接觸變化中的商業(yè)態(tài)勢(shì)，深入理解對(duì)產(chǎn)品的設(shè)計(jì)要求、設(shè)計(jì)定位，然后再依靠高度的創(chuàng)作沖動(dòng)，獲取設(shè)計(jì)靈感。全面的包裝設(shè)計(jì)，需對(duì)包裝裝飾與包裝結(jié)構(gòu)有所側(cè)重，跨出傳統(tǒng)的專(zhuān)業(yè)設(shè)計(jì)的范疇，同時(shí)兼?zhèn)涞纳鐣?huì)和科學(xué)職能所具有的較高的科技知識(shí)和文學(xué)修養(yǎng)所支配著，這樣才能運(yùn)籌帷幄、自如地解決好商品包裝的綜合表達(dá)能力。

在現(xiàn)代包裝設(shè)計(jì)上，我們提倡大膽創(chuàng)新，要適合現(xiàn)代人的不同層面的精神和情感等因素的需要，敢于冒險(xiǎn)而尋求新突破，注重個(gè)性體現(xiàn)不同類(lèi)別的商品設(shè)計(jì)，從多角度、多方面地創(chuàng)造出與內(nèi)容相適應(yīng)的現(xiàn)代包裝藝術(shù)形式，在技法上允許不同手法交互使用，在印刷上盡取不同工藝之所長(zhǎng)。因此，對(duì)于工藝制作的選擇是保證包裝藝術(shù)質(zhì)量的關(guān)鍵。包裝設(shè)計(jì)師不僅要意識(shí)到而且要準(zhǔn)確地、綜合和靈活地運(yùn)用現(xiàn)代技術(shù)，以使現(xiàn)代包裝設(shè)計(jì)藝術(shù)給人以豐富的聯(lián)想和美感，并且能具備可欣賞的、具有高品味、時(shí)代感和吸引力的整體形象的獨(dú)立性，從而讓人們?cè)谫?gòu)買(mǎi)商品時(shí)得到審美的美學(xué)價(jià)值。

2.包裝設(shè)計(jì)的獨(dú)特性

商品包裝要突出藝術(shù)個(gè)性。個(gè)性即矛盾的特殊性，人們對(duì)現(xiàn)實(shí)的審美意識(shí)具有無(wú)限豐富的多樣的個(gè)性差異，藝術(shù)的發(fā)展需要?jiǎng)?chuàng)造，而藝術(shù)創(chuàng)造的價(jià)值則寓于個(gè)性之中，每個(gè)藝術(shù)種類(lèi)的個(gè)性是它區(qū)別于其他藝術(shù)種類(lèi)的獨(dú)特本質(zhì)特點(diǎn)。包裝設(shè)計(jì)也是同樣，商品在流通時(shí)必須通過(guò)包裝來(lái)進(jìn)行區(qū)別。同類(lèi)的或不同類(lèi)的商品依靠其獨(dú)特的包裝設(shè)計(jì)來(lái)被消費(fèi)者識(shí)別認(rèn)定最終認(rèn)可而購(gòu)買(mǎi)。

包裝設(shè)計(jì)也要有強(qiáng)烈的視覺(jué)沖擊力。在琳瑯滿(mǎn)目的商品世界中，唯有亮麗的色彩，與眾不同的圖案造型，生動(dòng)地展現(xiàn)產(chǎn)品個(gè)性形象，才能使消費(fèi)者一見(jiàn)鐘情。

現(xiàn)代設(shè)計(jì)講求破除規(guī)矩、平板的格式，講究富于創(chuàng)造性的、生氣勃勃的審美感已成為一種潮流，以往煩瑣綺麗的風(fēng)格已被現(xiàn)代設(shè)計(jì)中簡(jiǎn)潔、大方、明快的格調(diào)所取代，給人們?cè)诿β档纳钪械靡苑潘?，從而吸引消費(fèi)者的注意，給消費(fèi)者以審美愉悅，激發(fā)購(gòu)買(mǎi)欲，所有這些正是包裝設(shè)計(jì)的獨(dú)特性所帶來(lái)的效應(yīng)。

利用包裝設(shè)計(jì)的獨(dú)特性開(kāi)拓市場(chǎng)之路、引領(lǐng)市場(chǎng)消費(fèi)作用不可低估，大有文章可做。

3.包裝設(shè)計(jì)的欣賞性

任何成功的藝術(shù)都富有美的價(jià)值，而美的藝術(shù)必須服務(wù)于現(xiàn)實(shí)生活，因?yàn)槊恳粋€(gè)藝術(shù)作品的產(chǎn)生都包括藝術(shù)取材、美的想象和表達(dá)，這是客觀表現(xiàn)與藝術(shù)內(nèi)容構(gòu)成的需要。包裝設(shè)計(jì)的藝術(shù)特點(diǎn)就是要表現(xiàn)內(nèi)在的本質(zhì)，而美必須符合實(shí)用、經(jīng)濟(jì)和準(zhǔn)確，迅速傳遞商品信息的原則?，F(xiàn)代包裝在設(shè)計(jì)上更關(guān)注情感，關(guān)注家庭，營(yíng)造生產(chǎn)氛圍，這已成為現(xiàn)代包裝設(shè)計(jì)審美特性的一項(xiàng)重要內(nèi)容。總體來(lái)看，這一系列包裝，注重實(shí)用與審美的統(tǒng)一，設(shè)計(jì)上更多關(guān)注是美學(xué)價(jià)值的含量，即在統(tǒng)一中求變化，在變化中又有一種完善的整體感，呈現(xiàn)出雅致而高貴的宣染力和優(yōu)美而深沉的歷史文化感。這種變化不僅是人類(lèi)的富足表現(xiàn)，也是提高人類(lèi)精神需要的表現(xiàn)，包裝所體現(xiàn)的民族風(fēng)格和時(shí)代氣魄的美，具有了一定的珍藏價(jià)值和欣賞意義。

4.包裝設(shè)計(jì)的傳播性

包裝設(shè)計(jì)還具有其審美的傳播性。在現(xiàn)代激烈競(jìng)爭(zhēng)的市場(chǎng)環(huán)境中，好的包裝設(shè)計(jì)不僅能讓廠商獲得豐厚的利潤(rùn)和效益，而且還能使消費(fèi)者在購(gòu)買(mǎi)商品使用價(jià)值的同時(shí)得到美的享受。應(yīng)該說(shuō)，商品的外表包裝是商品走向市場(chǎng)的必要組成部分。它是直接與顧客相識(shí)的首當(dāng)其沖的因素，消費(fèi)者正是通過(guò)它傳達(dá)的相關(guān)文字、圖形、色彩信息，直觀有效地認(rèn)識(shí)和把握商品品質(zhì)的優(yōu)劣，本身與商品性質(zhì)的適合度，做出是否喜愛(ài)和購(gòu)買(mǎi)的決策。

包裝設(shè)計(jì)的流行滲透著審美觀念的流行。包裝設(shè)計(jì)歸根到底是人的設(shè)計(jì);是以人的需要為主要功能的設(shè)計(jì);是植根于自身的歷史背景、文化傳統(tǒng)和民族精神的設(shè)計(jì)，真正流行與審美的設(shè)計(jì)是真實(shí)、科學(xué)、合理的設(shè)計(jì)。包裝設(shè)計(jì)的根本原則是藝術(shù)性與功能性的完美結(jié)合，任何脫離或有悖于功能性的所謂藝術(shù)性，都將失去其存在的意義;任何只注重功能性而沒(méi)有藝術(shù)性的設(shè)計(jì)，也喪失了包裝設(shè)計(jì)的藝術(shù)靈魂。我們要真正做到藝術(shù)性與功能性的完美結(jié)合，充分發(fā)揮出包裝設(shè)計(jì)的實(shí)用功能和審美價(jià)值，創(chuàng)造出更大的商業(yè)和文化價(jià)值。

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第5篇：細(xì)胞核的功能范文

【摘要】

目的 觀察新診斷老年糖尿?。―M）患者胰島β細(xì)胞功能特點(diǎn)及其與胰淀素、褪黑素的關(guān)系。方法 收集初診DM患者60例，其中老年DM組27例，成年DM組33例，對(duì)照組30例。均行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT），計(jì)算胰島β細(xì)胞功能指數(shù)（HOMAβ）。采用ELISA法檢測(cè)患者空腹血清胰淀素、褪黑素水平。同時(shí)測(cè)定所有受試者的血脂、體重指數(shù)（BMI）和腰臀比（WHR），并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 （1）老年DM組與成年DM組比較HOMAβ明顯降低〔(58.20±24.89) vs (81.20±40.80)，P

【關(guān)鍵詞】 糖尿病；老年；胰島β細(xì)胞功能；胰淀素；褪黑素

老年糖尿?。―M）與成年DM比較具有起病隱匿、癥狀不典型、進(jìn)展緩慢等特點(diǎn)，其發(fā)病原因尚不明了，胰島β細(xì)胞功能下降是其發(fā)病的主要機(jī)制之一。胰淀素和褪黑素是分別由胰腺和松果腺分泌的老年相關(guān)激素，近年國(guó)外有些研究表明胰淀素、褪黑素與老年DM的發(fā)生有一定的關(guān)系〔1，2〕。本研究通過(guò)口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT），分析老年DM患者的胰島β細(xì)胞功能特點(diǎn)；并檢測(cè)老年DM患者血清胰淀素、褪黑素的濃度，進(jìn)一步探討兩種老年相關(guān)激素與胰島β細(xì)胞功能的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

病例組60例，為2007年10月至2009年8月期間在我院內(nèi)分泌科住院及門(mén)診新診斷的2型糖尿?。═2DM）患者，年齡25～94歲，均未接受胰島素治療，符合下列標(biāo)準(zhǔn)：（1）行OGTT后均符合1999年WHO T2DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）空腹胰島素（Fins）≥5 μIU/ml；（3）空腹血糖（FPG）≤10 mmol/L。（4）谷氨酸脫羧酶抗體、胰島細(xì)胞自身抗體均陰性。按發(fā)病年齡分為兩組，老年DM組（≥60歲）27例，男14例，女13例，平均年齡（74.59±8.79）歲，成年≥組（25～59歲）33例，男17例，女16例，平均年齡（45.76±8.54）歲。健康老年對(duì)照組30例，選擇同期健康體檢者，年齡、性別與老年糖尿病組相匹配，無(wú)吸煙史，排除糖尿病、糖耐量減低、冠心病、高血壓、腦血管病及腫瘤等疾病。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集

所有受試者對(duì)本試驗(yàn)知情。老年健康體檢者在禁食12～14 h后，在無(wú)應(yīng)激情況下采空腹肘靜脈血。60例DM人均做OGTT及胰島素釋放試驗(yàn)，清晨空腹取靜脈血后一次性口服75 g葡萄糖，并分別于0.5、1、2、3 h后取靜脈血做血糖及胰島素測(cè)定。所有收集的血液分離出血清，于-70 ℃冰箱中保存待用。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)

采用OLYMPUS AU540全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清甘油三酯（TG）、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）和血清葡萄糖（GLU）。胰島素(INS)測(cè)定采用電化學(xué)發(fā)光免疫法，試劑由羅氏公司提供，儀器：電化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定儀2010Elecsys。胰淀素、褪黑素測(cè)定采用ELISA，應(yīng)用美國(guó)R&D公司試劑盒（板內(nèi)板間變異系數(shù)均小于10%），按說(shuō)明書(shū)操作。腰圍、臀圍、身高、體重由專(zhuān)人測(cè)定。

1.2.3 計(jì)算指標(biāo)

體重指數(shù)（BMI）=體重（kg）/身高2（m2）。腰臀比（WHR）=腰圍（cm）/臀圍（cm）。按HOMA模型計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)〔HOMAIR=(Fins×FPG)/22.5〕及胰島β細(xì)胞功能指數(shù)〔HOMAβ=20×Fins/(FPG-3.5)〕。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行，連續(xù)性計(jì)量資料以x±s表示，非正態(tài)分布的資料以對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換成正態(tài)分布后輸入。兩組間比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn) ，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)分析采用直線(xiàn)相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 各DM組OGTT各點(diǎn)血糖、胰島素值的比較

老年DM組OGTT 2 h血糖及胰島素值均高于成年DM組（均P

2.2 各組研究對(duì)象的臨床指標(biāo)比較

老年DM組與成年DM組比較，HOMAβ、TG均明顯降低（P

2.3 老年糖尿病組HOMAβ與其他指標(biāo)的相關(guān)性

在老年DM組內(nèi)，HOMAβ與褪黑素呈明顯正相關(guān)（r=0.403，P=0.016），與胰淀素(r=-0.461，P=0.003)、HOMAIR(r=-0.238，P=0.009)呈明顯負(fù)相關(guān)，與FPG、INS、TG、WHR則無(wú)明顯相關(guān)性，見(jiàn)表3。表3 老年糖尿病組胰島β細(xì)胞功能與其他指標(biāo)的相關(guān)性(略)

3 討 論

胰淀素，又稱(chēng)胰島淀粉樣多肽（IAPP），在胰島β細(xì)胞和胰島素一起表達(dá)、合成、分泌，被認(rèn)為是胰島素的孿生兄弟，各種影響胰島素分泌的因素同時(shí)也影響胰淀素的分泌。本研究結(jié)果顯示，老年DM組血清胰淀素水平明顯高于老年健康組，與國(guó)外〔3〕的研究結(jié)果相一致。相關(guān)分析還顯示HOMAβ與胰淀素、HOMAIR呈明顯負(fù)相關(guān)，說(shuō)明增高的胰淀素可能是老年糖尿病患者胰島素分泌缺陷的一個(gè)重要原因。胰淀素之所以能夠?qū)е乱葝u功能受損，一方面可能由于胰淀素能抑制胰島素的釋放，提高血漿游離脂肪酸的水平，抑制肌肉組織對(duì)葡萄糖的攝取，抑制肝細(xì)胞對(duì)葡萄糖的利用和促進(jìn)葡萄糖的產(chǎn)生而誘導(dǎo)胰島素抵抗的發(fā)生。另一方面，胰淀素可自我聚集、變性、沉積在胰島β細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)直接的氧化作用，在細(xì)胞膜形成特異性鈣離子通道，增加P53和P21的表達(dá)等機(jī)制引起胰島β細(xì)胞的損傷和凋亡，導(dǎo)致胰島β細(xì)胞絕對(duì)數(shù)目的減少〔4〕，使胰島素分泌最終減少。

通過(guò)抑制胰淀素的代謝異常、阻止胰淀素的聚集或拮抗其作用，均具有抗老年糖尿病的潛力。以胰淀素為作用靶點(diǎn)的藥物將可能成為治療老年糖尿病的全新手段。

褪黑素，N乙酰5甲氧基色胺，是色氨酸的衍生物。近年研究表明其是迄今已知的最強(qiáng)的自由基清除劑，能對(duì)抗氧化應(yīng)激，對(duì)DM及其并發(fā)癥有一定的治療作用〔5，6〕。Ha等〔7〕通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明褪黑素在分子水平上對(duì)血糖有穩(wěn)定作用，并進(jìn)一步推斷老化使內(nèi)源性褪黑素水平下降，可能與老年DM的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本文亦發(fā)現(xiàn)，老年DM組血清褪黑素水平明顯低于健康對(duì)照組，進(jìn)一步說(shuō)明了衰老導(dǎo)致的褪黑素水平下降可能為老年DM發(fā)生的原因之一。經(jīng)相關(guān)分析，本文還發(fā)現(xiàn)HOMAβ與褪黑素呈正相關(guān)。大量的動(dòng)物及人體試驗(yàn)也證明褪黑素能夠降低血糖，對(duì)胰島β細(xì)胞具有保護(hù)作用〔8，9〕。

綜上，胰淀素、褪黑素均與老年糖尿病胰島β細(xì)胞功能有一定的相關(guān)性，但具體的分子機(jī)制目前尚不清楚，仍有待進(jìn)一步深入研究。由于本研究樣本量有限，還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量更深入了解胰淀素、褪黑素與老年DM胰島β細(xì)胞功能的相互關(guān)系，從而尋求有效預(yù)防及治療老年DM的新途徑。

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第6篇：細(xì)胞核的功能范文

關(guān)鍵詞: 腎病綜合征;受體，白細(xì)胞介素2;T淋巴細(xì)胞;免疫，細(xì)胞

摘 要:目的 觀察原發(fā)性腎病綜合征（PNS）患者細(xì)胞免疫功能變化. 方法 采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清可溶性白細(xì)胞介素2受體（sIL-2R），流式細(xì)胞儀測(cè)定外周血T細(xì)胞亞群（CD3+ ，CD4+ ，CD8+ ）及紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)（RBC-C3b RR）和紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)（RBC-ICR）試驗(yàn). 結(jié)果 原發(fā)性腎病綜合征組sIL-2R明顯高于對(duì)照組［（398±122）vs（202±84）pmol?L-1 ，P

+ ，CD8+ 較對(duì)照組明顯降低（0.50±0.08）vs（0.71±0.07），（0.26±0.07）vs（0.36±0.07），（0.22±0.05）vs（0.31±0.06），P

Keywords:nephrotic syndrome;receptors，interleukin-2;T-lymphocytes;immunity，cellular

Abstract:AIM To investigate cellular immune function and　erythrocyte immune function in patients with primary nephrotic syndrome（PNS）.METHODS Soluble interleukin2receptors（sIL-2R）were detected by ELISA.T-lympho-cyte subsets（CD3+ ，CD4+ and CD8+ ）were also evaluated by flow cytometry（FCM）.The red blood cell C3b receptor rosette（RBC-C3b RR）and the red blood cell immune com-plexs rosette（RBC-ICR）were measured.RESULTS Serum sIL-2R levels were significantly higher in PNS than in normal controls ［（398±122）vs（202±84）pmol?L-1 ，P

0 引言

研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體免疫功能的異常或紊亂是引起腎臟疾病的基礎(chǔ)［1，2］ ，它在腎臟疾病的免疫發(fā)病機(jī)制中的作用日益受到重視［3，4］ .我們通過(guò)檢測(cè)原發(fā)性腎病綜合征（PNS）患者血清可溶性白細(xì)胞介素2受體（sIL-2R），T細(xì)胞亞群及紅細(xì)胞免疫功能，旨在探討PNS患者細(xì)胞免疫功能變化的意義.

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 PNS患者40（男22，女18）例，年齡16～64（平均40）歲，均為住院患者，通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢查及臨床確診.對(duì)照組20（男13，女7）例，年齡20～40（平均30）歲，血、尿常規(guī)及肝腎功能正常.

1.2 方法

1.2.1 血清SIL-2R的測(cè)定 采用雙抗體夾心ELISA法，試劑盒由第四軍醫(yī)大學(xué)免疫學(xué)教研室提供，具體操作步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行. 1.2.2 T細(xì)胞亞群的測(cè)定 取抗凝全血100μL，分別加10μL FITC標(biāo)記抗CD3、抗CD4、抗CD8和IgG鼠單抗混勻，室溫放置15min后，用QPREP自動(dòng)細(xì)胞制備儀（Bekmn-coulter公司產(chǎn)品），加ABC液溶解紅細(xì)胞和穩(wěn)定淋巴細(xì)胞，輕輕搖蕩10min立即用ProfileⅡ型流式細(xì)胞儀（美國(guó)Coullter公司產(chǎn)品）分析，所用激光光源為15mW氫離子激光，波長(zhǎng)為A488nm ，檢測(cè)1000個(gè)以上細(xì)胞.

1.2.3 紅細(xì)胞免疫功能的測(cè)定 采用C3b 受體花環(huán)（RBC-C3b RR）和紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)（RBC-ICR）試驗(yàn)（第四軍醫(yī)大學(xué)免疫學(xué)教研室提供）.預(yù)備試驗(yàn):將補(bǔ)體致敏的酵母和未致敏的酵母凍干試劑，按說(shuō)明書(shū)要求溶解、洗滌，配制成1×1011 個(gè)?L-1 的密度;另取患者末梢血或肝素125kU?L-1 抗凝血1滴，加入2mL生理鹽水，每次經(jīng)2000r?min-1 離心3min后，配制成1.25×1010 個(gè)?L-1 密度的紅細(xì)胞懸液.

吸取致敏酵母菌懸液與未致敏酵母菌懸液各50μL，分別加入試管中，混勻，置37℃水浴中30min后取出涂片，加2.5g?L-1 戊二醛1滴，輕輕混勻，自然干燥，進(jìn)行姬姆薩染色，用油鏡（Olympus，日本產(chǎn)）觀察.1個(gè)紅細(xì)胞上結(jié)合兩個(gè)或兩個(gè)以上酵母菌者為1個(gè)陽(yáng)性花環(huán)細(xì)胞，共計(jì)數(shù)200個(gè)紅細(xì)胞，計(jì)算出RBC-C3b RR和RBC-ICR的百分率（%）.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x ±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，用SPLM統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.

2 結(jié)果

2.1 sIL2R及T淋巴細(xì)胞亞群的變化 PNS患者外周血sIL-2R水平較對(duì)照組明顯增高，有顯著差異（P

+ ，CD8+ 較對(duì)照組明顯降低，有顯著差異（P

表1 sIL-2R及T淋巴細(xì)胞亞群的變化　略

2.2 紅細(xì)胞免疫功能的變化 PNS患者RBC-C3bRR明顯低于對(duì)照組，有顯著差異（P

表2 紅細(xì)胞免疫功能的變化　略

3 討論

PNS是由原發(fā)性腎臟病引起，并非是細(xì)菌等致病因子直接侵犯腎臟引起，而是與免疫反應(yīng)相關(guān)，當(dāng)致病的抗原進(jìn)入人體后，被吞噬細(xì)胞攝取，淋巴細(xì)胞對(duì)這些抗原進(jìn)行識(shí)別引起免疫反應(yīng)，造成腎小球損傷.目前已證實(shí)是一組免疫介導(dǎo)性疾?。?］ .T淋巴細(xì)胞亞群是構(gòu)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要因素，體內(nèi)免疫平衡是通過(guò)輔T細(xì)胞CD4+ 和抑制性T細(xì)胞CD8+ 形成的T細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)來(lái)維持調(diào)節(jié)免疫功能的平衡［6］ ，二者的升高與降低，均可使兩者的比例失調(diào)，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的異?；蛭蓙y［7］ .免疫學(xué)研究證實(shí)，紅細(xì)胞具有抗原提呈細(xì)胞作用，能促進(jìn)T細(xì)胞的免疫功能，擴(kuò)大細(xì)胞免疫效應(yīng)，參與細(xì)胞免疫調(diào)控［8］ ，并能清除體內(nèi)的免疫復(fù)合物，促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬功能，調(diào)節(jié)體液免疫和細(xì)胞免疫，粘附自身的T細(xì)胞，增強(qiáng)T細(xì)胞免疫功能，更有效地清除免疫復(fù)合物［9］ .本資料顯示PNS患者血清sIL-2R水平明顯高于對(duì)照組（P

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第7篇：細(xì)胞核的功能范文

【摘要】 目的 觀察連枷胸犬胸壁加壓包扎、肋骨牽引和手術(shù)內(nèi)固定的治療效果。方法 實(shí)驗(yàn)用Beagle犬24只，隨機(jī)分為A組(對(duì)照組)、B組(包扎治療組)、C組(牽引治療組)和D組(手術(shù)固定組)，每組6只，建立大面積(15cm2/kg)浮動(dòng)胸壁動(dòng)物摸型。用MPA動(dòng)物肺功能記錄儀、血?dú)夥治?、胸腔置管等觀察犬呼吸頻率(RR)、潮氣量(Vt)、每分鐘靜息通氣量(VE) 、肺順應(yīng)性(CL)、氣道阻力(Raw)、動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)、動(dòng)脈血二氧化碳分壓(PaCO2)、動(dòng)脈血氧飽和度(SaO2)、剩余堿(BE)及胸膜腔內(nèi)壓(IPP)等變化，比較胸壁加壓包扎、肋骨牽引固定和手術(shù)內(nèi)固定的治療效果。結(jié)果 浮動(dòng)胸壁模型完成后，均出現(xiàn)反常呼吸，胸膜腔內(nèi)壓負(fù)壓絕對(duì)值減小(P

【關(guān)鍵詞】 連枷胸；生理學(xué)；肋骨骨折；牽引術(shù)；包扎；內(nèi)固定

Abstract： Objective To study curative effect of pressure dressing on chest wall，traction and internal fixation on pulmonary function in dogs with flail chest.Methods A total of 24 Beagle dogs were set up as great floating thoracic wall models(15cm2/kg)， then pided into internal fixation group，rib skeletal traction group，pressure dressing group and control group randomly，with 6 dogs in each group.The change of respiratory rate(RR)，tidal volume(Vt)，minute ventilation(VE)，lung compliance(CL)，airway resistance(Raw)，partial pressure of oxygen in artery (PaCO2)，partial pressure of carbon dioxide in artery(PaCO2)，arterial oxygen saturation(SaO2)，base excess(BE)，intrapleural pressure(IPP) were observed and recorded by MPA pulmonary function recorder and blood gas analysis.At last the therapeutic effect was compared among 4 groups.Results Paradoxical respiration occurred；intrapleural pressure decreased(P

Key words：flail chest;physiology;rib fracture;traction;dressing；internal fixation

連枷胸是最嚴(yán)重的胸壁損傷，其病死率達(dá)12%～50%［1］。對(duì)連枷胸浮動(dòng)胸壁固定治療，其固定方法的選擇與對(duì)連枷胸所牽涉的復(fù)雜的病理生理的認(rèn)識(shí)密切相關(guān)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者大多認(rèn)為連枷胸所致的呼吸困難主要是由肺挫傷和反常呼吸引起［2］ 。筆者通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，排除肺挫傷的影響。觀察大面積浮動(dòng)胸壁對(duì)犬呼吸功能的影響以及胸壁加壓包扎、肋骨牽引和手術(shù)內(nèi)固定治療的作用。

材料與方法

1 動(dòng)物分組與模型建立

試驗(yàn)用Beagle犬24只，體重為(10.32±1.56)kg。用3%戊巴比妥鈉(25mg/kg)靜脈注射麻醉，氣管插管后在右側(cè)胸部相應(yīng)面積(15cm2/kg)肋骨的兩端切開(kāi)胸壁皮膚，各游離肋骨3cm，保持胸膜完整，切斷并剪去肋骨1cm，以確保損傷區(qū)域的胸壁能隨呼吸自由浮動(dòng)，縫合切口。模型制成后，隨機(jī)分為4組，每組各6只犬（雌雄不拘）。A組為對(duì)照組，不進(jìn)行治療干預(yù)；B組為包扎治療組：以浮動(dòng)胸壁為中心，選用相應(yīng)大小的厚棉墊加壓包扎，使浮動(dòng)胸壁極度內(nèi)陷，進(jìn)而消除反常呼吸；C組為牽引治療組：行肋骨巾鉗懸吊牽引固定，牽引重量為0.5～1kg，以正好對(duì)抗反常呼吸運(yùn)動(dòng)為宜；D組行手術(shù)切開(kāi)復(fù)位，鋼板＋螺絲釘內(nèi)固定治療。上述3種治療方法，在治療過(guò)程中均需保持胸膜腔完整。

2 觀察指標(biāo)

對(duì)實(shí)驗(yàn)犬行全麻氣管插管后，氣管插管外接MPA動(dòng)物肺功能記錄儀，測(cè)呼吸頻率（RR）、潮氣量(Vt)、每分鐘通氣量(VE)、肺順應(yīng)性(CL)、氣道阻力(Raw)。于術(shù)側(cè)腋中線(xiàn)第8肋間置胸腔管，接MPA動(dòng)物肺功能記錄儀測(cè)胸膜腔內(nèi)壓（IPP），適時(shí)記錄測(cè)量結(jié)果。采抽取動(dòng)脈血測(cè)動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)、動(dòng)脈血二氧化碳分壓(PaCO2)、動(dòng)脈血氧飽和度(SaO2)、剩余堿（BE）、SB等。分別記錄模型建立前、制模1小時(shí)、A組制模4小時(shí)、B、C、D組模型建立后4小時(shí)的上述觀察指標(biāo)。

3 數(shù)據(jù)處理

所測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用多個(gè)樣本均數(shù)間的多重比較的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法（SNKq）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

結(jié) 果

浮動(dòng)胸壁模型完成后，24只犬均出現(xiàn)胸壁反常運(yùn)動(dòng)，浮動(dòng)幅度2～3cm。胸膜腔內(nèi)壓負(fù)壓絕對(duì)值減小(P

討 論

1 連枷胸行胸壁固定治療的理論依據(jù)

胸壁的完整性對(duì)呼吸功能的維持有重要作用。連枷胸肺容量的減少主要是胸壁不穩(wěn)及肺挫傷所致的纖維化導(dǎo)致。通常將連枷胸分類(lèi)為前外側(cè)區(qū)和后外側(cè)區(qū)，兩種類(lèi)型均包含側(cè)面區(qū)域，該區(qū)有反映呼吸力學(xué)的前鋸肌指狀突的插入。Borrelly等［3］報(bào)道前鋸肌在連枷區(qū)錯(cuò)位復(fù)雜的病理生理過(guò)程中有重要作用，當(dāng)涉及肩關(guān)節(jié)活動(dòng)或作為吸氣肌時(shí)，連于每根肋骨上的前鋸肌指狀突有如拉抽屜一樣使連枷區(qū)錯(cuò)位，使其向后上方移位，由此產(chǎn)生肋骨斷端重疊，并會(huì)導(dǎo)致傷者肺容量減少的惡性循環(huán)。外科手術(shù)固定骨折肋骨可有效防止或中止肋骨錯(cuò)位的惡性循環(huán)，早期復(fù)位和固定骨折肋骨，恢復(fù)胸壁的幾何形狀，保持胸壁的完整性，避免了因胸壁變形對(duì)肺功能的損害。Voggenreiter等［4］證實(shí)了對(duì)無(wú)肺挫傷連枷胸患者首先行手術(shù)治療的重要性。據(jù)Clark等［5］統(tǒng)計(jì)31％的孤立性肺挫傷患者需要機(jī)械通氣治療，而57％的孤立性連枷胸患者需要機(jī)械通氣治療，再次強(qiáng)調(diào)了胸壁機(jī)械性完整性的重要作用。

2 胸壁加壓包扎固定的治療效果

20世紀(jì)初期對(duì)連枷胸采用捆綁固定的方法進(jìn)行治療，當(dāng)時(shí)認(rèn)為包扎固定可增加胸壁穩(wěn)定性、減少疼痛和可能有助于咳嗽。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在大面積連枷胸包扎固定后與對(duì)照組比較，IPP、Raw、RR顯著升高（P

3 牽引固定的治療效果

肋骨牽引固定是過(guò)去臨床常用于浮動(dòng)胸壁的一種方法，認(rèn)為牽引固定后連枷胸側(cè)胸壁的幾何形狀可恢復(fù)，胸腔容積可增加，牽引固定保持了胸壁的完整性，避免了因胸壁變形對(duì)其下肺區(qū)域的壓迫，從而能產(chǎn)生足夠的潮氣量。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與對(duì)照組比較，牽引治療后Vt、Raw顯著升高（P0.1）。說(shuō)明牽引治療后實(shí)驗(yàn)犬的潮氣量雖有部分增加，但I(xiàn)PP、PaO2、PaCO2、SaO2、BE、CL、VE、RR變化不明顯，其低氧狀態(tài)未能得到有效改善。這主要是因?yàn)榇竺娣e浮動(dòng)胸壁形成后，牽引固定雖能部分改善通氣，但由于牽引外力持續(xù)作用于傷側(cè)胸壁，對(duì)抗其彈性回縮，被牽引的浮動(dòng)胸壁無(wú)法與健側(cè)胸壁進(jìn)行協(xié)同呼吸運(yùn)動(dòng)，無(wú)法恢復(fù)肋骨生理狀態(tài)杠桿作用，胸廓生理狀態(tài)的完整性未能得以恢復(fù)，肺的順應(yīng)性改善不明顯，故呼吸功能仍不能恢復(fù)正常，缺氧狀態(tài)無(wú)法得到有效改善。所以，至少對(duì)于大面積連枷胸來(lái)說(shuō)，單純行牽引固定無(wú)法達(dá)到滿(mǎn)意療效。

4 手術(shù)內(nèi)固定的治療效果

1975年Richardson等［6］首次報(bào)道了用鋼絲修復(fù)胸骨骨折的方法。連枷胸手術(shù)內(nèi)固定可有效地減少機(jī)械通氣時(shí)間和ICU時(shí)間，減少肺炎的發(fā)病率及降低病死率，恢復(fù)胸壁的幾何形狀及生理狀態(tài)的完整性，恢復(fù)肋骨生理狀態(tài)杠桿作用，提高傷側(cè)肺的順應(yīng)性，進(jìn)而改善呼吸功能。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，手術(shù)內(nèi)固定治療后PaO2、PaCO2、SaO2、CL、Vt、VE顯著升高（P

參考文獻(xiàn)

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第8篇：細(xì)胞核的功能范文

[關(guān)鍵詞] 伊貝沙坦；比索洛爾；心力衰竭；細(xì)胞因子；左心室功能

[中圖分類(lèi)號(hào)] R541.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2011）32-01-03

The Effects of Combination of Irbesartan and Bisoprolol on Serum Cytokine Levels and Left Ventricular Function Parameters of Patients with Chronic Heart Failure.

ZENG Lizhong XIE Zhenhua YANG Weiping

1.The Chronic Diseases Hospital of Luohu District of Shenzhen City in Guangdong Province，Shenzhen 518023，China；2.Shenzhen City Luohu District Hospital for Chronic Diseases，Shenzhen 518023，China；3. Guangdong Province Huizhou Central People’s Hospital，Huizhou 516001，China

[Abstract] Objective To investigate the effects of combination of irbesartan and bisoprolol on the serum cytokine levels and left ventricular function of patients with chronic heart failure. Methods We chose 80 cases of chronic heart failure patients and randomly divided them. The patients in treatment group were administrated combination of irbesartan 150mg Qd and bisoprolol 5mg Qd for one year，and those in control group were only administrated irbesartan 150mg Qd for one year. Before and after the treatment，the levels of serum cytokine levels and left ventricular function parameters were measured，and the side effects of two groups were also observed. Results In both groups，the levels of the serum levels of cytokines including interleukin-1（IL-1），interleukin-6（IL-6） and tumor necrosis factor-α（TNF-α） were lower than those before treatment（P＜0.05）. Compared with the control group，the changes in treatment group were significant（P＜0.05）. The left ventricular functions of both groups were significantly improved（P＜0.05），and more significant changes were found in patients of treatment group（P＜0.05）. Conclusion Combination of irbesartan and bisoprolol can effectively lower the serum levels of cytokines in patients with chronic heart failure，and improve their left ventricular function. Therefore，it can be an ideal method of therapy for the patients with chronic heart failure.

[Key words] Irbesartan；Bisoprolol；Heart failure；Cytokine；Left ventricular function

慢性心力衰竭是指由各種心臟疾病導(dǎo)致心功能不全的一種常見(jiàn)臨床綜合征，絕大多數(shù)情況下是指心肌收縮力下降使心排出量不能滿(mǎn)足機(jī)體代謝需要，器官組織灌流不足，同時(shí)出現(xiàn)體循環(huán)和（或）肺循環(huán)淤血，是各種器質(zhì)性心臟病發(fā)展的最終階段，也是導(dǎo)致心臟病患者死亡的重要原因。研究表明，慢性心力衰竭是一個(gè)以免疫激活和低程度的慢性炎癥為特點(diǎn)的疾病。一些炎癥因子能通過(guò)促進(jìn)心肌細(xì)胞肥厚、心肌收縮功能惡化以及誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，在心衰的發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。其中，血清腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（Interleukin-1，IL-1）及白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）等細(xì)胞因子異常激活參與了心力衰竭和心肌重構(gòu)的發(fā)生過(guò)程，是心力衰竭重要的發(fā)病機(jī)制[1-3]。

伊貝沙坦（安博維，杭州賽諾菲-安萬(wàn)特民生制藥有限公司）作為血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑，是高血壓和慢性心衰治療的一線(xiàn)藥物[4，5]。比索洛爾是選擇性β-腎上腺素受體阻斷劑，能抑制慢性心力衰竭患者的心肌重塑，降低心衰死亡率[6]。本研究隨機(jī)選擇慢性心衰患者80例，探討合用伊貝沙坦和比索洛爾對(duì)慢性心衰患者細(xì)胞因子和左室功能的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用隨機(jī)的方式選擇2006年10月～2008年9月在本院住院或門(mén)診就診的慢性心衰患者共80例，隨機(jī)分成治療組和對(duì)照組。在強(qiáng)心和利尿等常規(guī)治療基礎(chǔ)上，治療組口服伊貝沙坦150mg/d，比索洛爾5mg/d；對(duì)照組口服伊貝沙坦150mg/d，療程為1年。其中，治療組共40例，男性29例，女性11例，平均（67±11）歲，按NYHA心功能分級(jí)為Ⅱ級(jí)31例，Ⅲ級(jí)9例；對(duì)照組40例，男性28例，女性12例，平均年齡（68±10）歲，Ⅱ級(jí)32例，Ⅲ級(jí)8例。兩組患者在年齡、性別和心功能分級(jí)上均無(wú)顯著差異（P=0.62，0.47，0.85）。入選的患者依據(jù)病史、癥狀、體征、超聲心動(dòng)圖和X線(xiàn)檢查等確診慢性心衰，并除外急性腦血管病、肝腎功能不全和惡性腫瘤者。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)

服藥前和及服藥后1年清晨抽取空腹血10mL，離心取血清置于-80℃冰箱保存待測(cè)。用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測(cè)定血清IL-1、IL-6和TNF-α水平，試劑盒產(chǎn)于福建邁新生物公司，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。采用美國(guó)HP-1000型超聲心動(dòng)圖機(jī)檢測(cè)左室功能指標(biāo)：左心室射血分?jǐn)?shù)（EF）、心輸出量（CO）、左室舒張末期容量（LVEDV）和左心室小徑縮短率（FS）。同時(shí)嚴(yán)密觀察患者不良反應(yīng)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)用（χ±s）表示，組間比較采用分組t檢驗(yàn)，治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清IL-1、IL-6和TNF-α水平比較

兩組患者治療前血清IL-1、IL-6和TNF-α水平無(wú)明顯差異（P＞0.05）。治療后兩組患者IL-1、IL-6和TNF-α水平降低（P＜0.05），但治療組降低較對(duì)照組更為明顯（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 兩組患者左心室功能指標(biāo)比較

治療前治療組和對(duì)照組左心室功能指標(biāo)無(wú)顯著差異（P＞0.05）；治療后兩組患者左心室功能均明顯改善（P＜0.05），治療組改善更加明顯（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 兩組患者血壓和心率比較

治療組和對(duì)照組患者血壓和心率治療前無(wú)顯著差異（P＞0.05）。治療后兩組患者血壓和心率均有下降（P＜0.05），但是兩組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 不良反應(yīng)觀察

治療組發(fā)生低血壓3例，不良反應(yīng)發(fā)生率是7.5%，對(duì)照組發(fā)生低血壓2例，不良反應(yīng)發(fā)生率是5%，兩組無(wú)顯著性差異（P=0.54）。所有患者未出現(xiàn)血管神經(jīng)性水腫和腎功能不全等嚴(yán)重不良反應(yīng)。

3 討論

報(bào)道表明細(xì)胞因子在慢性心力衰竭病理生理和發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用。慢性心力衰竭患者常伴炎癥細(xì)胞因子的過(guò)度激活，導(dǎo)致IL-1、IL-6和TNF-α等細(xì)胞因子的過(guò)度分泌，促進(jìn)心肌重塑， 引起心肌細(xì)胞凋亡、壞死和間質(zhì)增生，造成心肌受損與加重心功能惡化，是慢性心力衰竭發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制[7]。其中，IL-1是由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的多肽物質(zhì)，具有廣泛的生物學(xué)活性，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)中起著重要的作用。IL-1能通過(guò)影響基因水平上的C型利鈉肽表達(dá)，促進(jìn)其在心衰中自分泌和內(nèi)分泌作用，參與慢性心衰過(guò)程中的左心室心肌重塑[8]。IL-6是由一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，可介導(dǎo)炎癥細(xì)胞激活和炎癥因子釋放，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞聚集和心肌細(xì)胞損害。TNF-α是重要的炎性介質(zhì)，可以通過(guò)促進(jìn)內(nèi)皮素-1產(chǎn)生，導(dǎo)致炎癥和心肌細(xì)胞壞死，降低心肌收縮力，引起心肌損傷[9]。此外，TNF-α還可通過(guò)激活基質(zhì)金屬蛋白酶和抑制基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑表達(dá)參與細(xì)胞外基質(zhì)重塑，促進(jìn)心肌重塑，加重左心室衰竭的發(fā)生。IL-1、IL-6和TNF-α可通過(guò)心肌細(xì)胞與細(xì)胞因子受體反應(yīng)，提高誘生型一氧化氮合成酶活性，削弱兒茶酚胺正性肌力作用，誘導(dǎo)氧自由基生成，促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡及壞死，加速促進(jìn)心肌重構(gòu)。心肌損傷又可引起上述細(xì)胞因子過(guò)度分泌，形成惡性循環(huán)，促進(jìn)心衰發(fā)生發(fā)展。因此，炎癥細(xì)胞因子的過(guò)度激活是慢性心衰的重要發(fā)病機(jī)制。

伊貝沙坦能較完全地阻斷血管緊張素Ⅱ和醛固酮的過(guò)度激活，是當(dāng)前慢性心衰治療的一線(xiàn)用藥。本研究發(fā)現(xiàn)對(duì)照組患者經(jīng)伊貝沙坦治療后，細(xì)胞因子水平明顯降低，左室功能改善，表明伊貝沙坦能有效抑制細(xì)胞因子的分泌，改善左室功能。血管緊張素Ⅱ與受體結(jié)合后，作用于核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB并上調(diào)多種炎癥細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)IL-1和IL-6等多種炎癥細(xì)胞因子分泌[10]。所以，伊貝沙坦可能通過(guò)阻斷血管緊張素Ⅱ受體，抑制IL-1、IL-6和TNF-α等細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄和分泌，抑制炎癥反應(yīng)并改善左心室功能。血管緊張素Ⅱ還能通過(guò)拮抗血管緊張素Ⅱ縮血管作用，增加腎臟血流，促進(jìn)ET清除[11]，阻斷ET和血管緊張素Ⅱ介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑引起的心肌重塑，同時(shí)減少緩解肽降解，增加緩解肽水平，拮抗心肌細(xì)胞凋亡，防止心肌損傷和心功能受損。

比索洛爾是一種選擇性β1受體阻滯劑，在目前各種選擇性β1受體阻滯劑異性最高，能較完全地阻斷神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)過(guò)度激活產(chǎn)生的不良作用，是具有良好心血管保護(hù)作用的藥物。本文發(fā)現(xiàn)聯(lián)用伊貝沙坦和比索洛爾能更顯著降低慢性心衰患者細(xì)胞因子水平，改善左心室功能，這表明比索洛爾可以協(xié)同伊貝沙坦，發(fā)揮抑改善左心室功能和心肌保護(hù)的作用。研究表明，炎癥細(xì)胞因子的分泌與交感神經(jīng)興奮和兒茶酚胺產(chǎn)生增加有關(guān)[12]，所以，比索洛爾可能通過(guò)選擇性阻斷β1受體，抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)的過(guò)度激活，減少兒茶酚胺的產(chǎn)生，抑制上述細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄及其分泌，降低血清IL-1、IL-6和TNF-α水平，改善左心室功能。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)兩組患者治療后血壓和心率無(wú)顯著差異，說(shuō)明比索洛爾對(duì)慢性心衰患者細(xì)胞因子和左心室功能的作用與其對(duì)血壓和心率的影響無(wú)關(guān)。同時(shí)，兩組患者治療不良反應(yīng)較少，說(shuō)明聯(lián)用伊貝沙坦和比索洛爾有較好安全性。

總之，與單用伊貝沙坦相比，聯(lián)用伊貝沙坦和比索洛爾能更有效降低慢性心衰患者細(xì)胞因子水平，改善其左心室功能，是慢性心力衰竭理想的治療方案。

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第9篇：細(xì)胞核的功能范文

[關(guān)鍵詞] 精神分裂癥；細(xì)胞免疫；T淋巴細(xì)胞亞群；白介素

[中圖分類(lèi)號(hào)] R749.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2013）02（c）-0012-03

近年來(lái)，精神分裂癥的免疫功能學(xué)逐漸成為了精神病學(xué)界的研究熱點(diǎn)，神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)之間的相互作用、相互調(diào)節(jié)關(guān)系日益受到重視。大量研究結(jié)果表明，精神分裂癥患者很可能存在病毒感染與自身免疫系統(tǒng)的問(wèn)題。電針治療是指在刺入人體穴位的毫針上，采用電針機(jī)通以微量低頻脈沖電流的一種治療方法，目前在臨床上已得到廣泛的應(yīng)用，且取得了較好的治療效果[1-6]。目前，電針治療應(yīng)用于慢性精神分裂癥患者的報(bào)道并不多見(jiàn)。所以，為了檢驗(yàn)電針合并抗精神病藥物治療對(duì)慢性精神分裂癥患者免疫功能的影響，特進(jìn)行此次研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

患者均來(lái)自呼和浩特市康復(fù)醫(yī)院連續(xù)性住院的慢性精神分裂癥患者（即經(jīng)過(guò)兩種以上藥物系統(tǒng)或間斷性治療而無(wú)效、且排除其他軀體障礙者）。實(shí)驗(yàn)時(shí)間從2009年6月～2010年2月。根據(jù)DSM-IV有關(guān)精神分裂癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取無(wú)嚴(yán)重軀體疾病及自身免疫性疾病、無(wú)煙酒嗜好和藥物濫用、非妊娠和哺乳期的慢性精神分裂癥患者65例，并分為藥物治療組和針?biāo)幹委熃M。藥物治療組患者34例，其中，男20例，女14例；年齡19～63歲，平均（44.2±10.1）歲；病程5～38年，平均（19.5±9.5）年。針?biāo)幹委熃M31例，其中，男18例，女13例；年齡20～58歲，平均（40.4±8.5）歲；病程 5～37年，平均（15.8±8.8）年。兩組患者年齡和病程等一般情況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。其中藥物治療組患者于實(shí)驗(yàn)第1周及第4周脫落2例，針?biāo)幹委熃M于第2周脫落1例。

1.2 方法

1.2.1 藥物治療組 選用氯氮平治療，劑量150 mg/d，1次/d，每晚口服，治療觀察時(shí)間為6周。

1.2.2 針?biāo)幹委熃M 除應(yīng)用上述藥物治療外，每日針灸1次，并使用電針儀輔助治療，時(shí)間為20 min/次，電量以患者能承受的最大電量為度；選取百會(huì)、印堂、四神聰、膻中等穴位，治療觀察時(shí)間為6周。選用長(zhǎng)2寸的針具，手法為平補(bǔ)平泄。

1.3 臨床評(píng)估

在治療開(kāi)始前及治療第6周后，由2名經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的主治醫(yī)生采用簡(jiǎn)明精神量表（BPRS）、陰性癥狀量表（SANS）、陽(yáng)性癥狀量表（SAPS）評(píng)定所有被試者的精神癥狀[7-8]。

1.4 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

所有被試均在治療前1 d及治療第6周后早晨6～7點(diǎn)取空腹靜脈血5 mL，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8；采用 Elisa法測(cè)定白介素2（IL-2）、白介素6（IL-6）水平。CD3、CD4和CD8試劑盒以及流式細(xì)胞儀均由BD公司提供；IL-2和IL-6試劑盒由 Beckman公司提供。所有樣本均由同一名人員測(cè)定，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理與分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組療效評(píng)定比較

兩組患者在治療6周后的BPRS、SAPS和SANS量表得分顯著低于治療前（P < 0.01）。針?biāo)幹委熃M治療6周后BPRS、SAPS和SANS量表得分顯著低于藥物治療組（P < 0.01）。見(jiàn)表1。

2.2 兩組治療后臨床量表的減分率比較

經(jīng)過(guò)6周的治療后，針?biāo)幹委熃M的臨床量表評(píng)分減分率顯著大于藥物治療組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表2。

2.3 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)比較

針?biāo)幹委熃M的CD4的水平在治療后顯著高于藥物治療組（P < 0.05），其他因子組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 兩組治療前后IL-2、IL-6水平的比較

兩組患者治療前血清IL-2、IL-6比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）；治療后針?biāo)幹委熃M血清IL-2、IL-6水平顯著低于藥物治療組（P < 0.05、P < 0.01）。見(jiàn)表4。

2.5 安全評(píng)估

試驗(yàn)期間，兩組患者均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。

3 討論

隨著細(xì)胞免疫學(xué)的發(fā)展.有關(guān)精神分裂癥患者細(xì)胞因子及其受體的研究已成為精神神經(jīng)免疫學(xué)中較為活躍的領(lǐng)域之一。很多研究證實(shí)精神分裂癥患者存在免疫功能的異常，并且具有自身免疫性疾病的特點(diǎn)，主要是CD3、CD4、IL-2和IL-6的改變與中樞神經(jīng)遞質(zhì)的異常，尤其是多巴胺能神經(jīng)元功能亢進(jìn)，這些變化主要是通過(guò)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)相互影響。但三者之間的改變何為初始原因，何為繼發(fā)因素尚難判斷，故對(duì)精神分裂癥進(jìn)行免疫學(xué)研究有助于揭示其病理機(jī)制。

以往的一些研究表明[9-15]，額葉-紋狀體-丘腦-顳葉回路的功能紊亂是精神分裂癥的病理性基礎(chǔ)之一，其中尤以海馬、杏仁核的功能紊亂為主；免疫學(xué)的研究表明IL-2在上述回路中具有較高的代謝和合成密度。因此，增高的IL-2 水平將對(duì)上述這些大腦解剖部位產(chǎn)生特異性的影響，從而引起一系列神經(jīng)遞質(zhì)（如DA 、5-HT、Ach和NE等）的改變， 導(dǎo)致了精神分裂癥患者精神癥狀和認(rèn)知功能障礙。另外，IL-2能增加多巴胺能神經(jīng)傳遞并且參與自身免疫和細(xì)胞生長(zhǎng)。腦脊液中IL-2的濃度比兒茶酚胺代謝物與疾病復(fù)發(fā)的關(guān)系更緊密。本研究發(fā)現(xiàn)藥物合并電針治療組精神分裂癥患者血清IL-2水平均顯著低于低于藥物組，且藥物合并電針治療組各臨床量表減分率大于藥物組。說(shuō)明電針合并藥物治療可以更好的降低IL-2水平，從而緩解精神分裂癥癥狀與既往研究相似[19-20]。

IL-6是臨床免疫學(xué)研究較多的細(xì)胞因子之一。既往研究證實(shí)DA和5-HT的功能受到IL-6的影響[4-6]。原因是產(chǎn)生IL-6 的淋巴細(xì)胞膜上有DA受體和5-HT受體存在，而這可明顯提高額前葉與海馬的DA和5-HT的活性與濃度。因此，可以說(shuō)由IL-6濃度或活性的增高所引起的免疫功能的調(diào)節(jié)紊亂及其所促發(fā)的免疫損傷很可能是精神分裂癥的主要影響因子之一[21]。而在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，針?biāo)幹委熃M的IL-6的水平顯著低于藥物治療組且藥物合并電針治療組的BPRS、SPAS、SANS臨床量表評(píng)分較治療前均下降。這說(shuō)明通過(guò)電針治療可能抑制了IL-6的生成，從而對(duì)精神分裂癥的免疫功能紊亂進(jìn)行了糾正，使精神癥狀有所緩解。

目前，從對(duì)精神分裂癥患者T細(xì)胞亞群進(jìn)行的大量研究中可以看出，精神分裂癥患者的外周血中確實(shí)存在著T細(xì)胞比率顯著下降的狀況，而輔T淋巴細(xì)胞CD4細(xì)胞的降低可能是引發(fā)這一改變?cè)摰闹饕?。所以，可以推測(cè)，精神分裂癥患者體內(nèi)的β-內(nèi)啡肽是明顯增多的，而β-內(nèi)啡肽具有降低CD3和CD4細(xì)胞的作用，導(dǎo)致精神分裂癥患者免疫功能紊亂或降低。此外，也有研究表明，激活的T細(xì)胞分泌的IL-2會(huì)反過(guò)來(lái)作用于T細(xì)胞使其擴(kuò)增，而IL-2與其受體的高親和力結(jié)合能使CD4細(xì)胞達(dá)到完全活化狀態(tài)。但若是高濃度的IL-2持續(xù)對(duì)CD4細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)量的信號(hào)刺激則會(huì)誘發(fā)CD4細(xì)胞啟動(dòng)凋亡程序，進(jìn)而導(dǎo)致CD4 以及CD3等免疫細(xì)胞的數(shù)量降低等。在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，針?biāo)幹委熃M治療后血清的CD4水平顯著高于治療前和高于藥物治療組，與上述研究結(jié)果是一致的[3，5]。

大量的研究資料表明[16-17]，針灸能改變機(jī)體的特異和非特異性免疫功能，對(duì)免疫細(xì)胞和免疫分子均有明顯的影響。針灸的免疫效應(yīng)主要表現(xiàn)在經(jīng)其穴位刺激后能夠引起局部的神經(jīng)或感受器將其傳入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，進(jìn)而刺激神經(jīng)中樞釋放神經(jīng)遞質(zhì)等一系列變化，最終實(shí)現(xiàn)調(diào)控機(jī)體免疫功能的作用。此外，針灸引起機(jī)體交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)的興奮，促使其釋放兒茶酚胺及阿片類(lèi)物質(zhì)等，進(jìn)而作用于相應(yīng)受體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。有研究表明，脾虛泄瀉模型的大鼠外周血中CD3、CD4和CD8細(xì)胞減少，而經(jīng)針灸天樞穴后其CD3和CD4細(xì)胞數(shù)量均有所回升，且CD4/CD8比值也升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中針?biāo)幗MCD4水平治療后高于治療前，也高于藥物組，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與多數(shù)研究結(jié)果一致[22-25]。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)兩種不同方法的治療，針?biāo)幗M血清CD4水平高于藥物組，血清IL-6、IL-2水平低于藥物組。針?biāo)幗MBPRS、SAPS、SANS臨床量表評(píng)分減分率均高于藥物組，針?biāo)幗M較藥物組臨床癥狀緩解明顯。電針合并藥物治療對(duì)精神分裂癥癥狀的緩解作用優(yōu)于單純藥物治療組：即電針在改善精神分裂癥癥狀的同時(shí)可更好地調(diào)節(jié)與精神分裂癥癥狀相關(guān)的細(xì)胞免疫因子水平。

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